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葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒說明書

瀏覽次數:1953 發布日期:2019-11-13  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
測定意義
GOD(EC 1.1.3.4)廣泛存在于動物、和植物中,催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸,并產生H2O2 ,是生物體中產生活性氧的代謝途徑之一。
測定原理
GOD催化產生H2O2,過氧化物酶在有氧存在時催化H2O2分解產生的氧又將鄰聯茴香胺氧化生成有色物質,顏色深淺與葡萄糖氧化酶活性成線性關系。
試驗中所需的儀器和設備
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液:液體60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體40mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體8mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體2mL×1 支,4℃保存;
樣品測定的準備
組織處理:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
血清(漿):直接檢測。
測定步驟
1、分光光度計預熱 30min以上,調節波長至500nm,蒸餾水調零。
2、GOD檢測工作液的配制:用時將試劑二和試劑三轉移至試劑一中,充分混勻,待用;用不完的試劑 4℃可保存一周;
3、測定前將 GOD 檢測工作液在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min 以上。
4、在1mL玻璃比色皿中加入 40μL 樣本和 960μL 工作液,立即混勻并計時,記錄 500nm下20s吸光值A1和1min20s 后的吸光值 A2。計算 ΔA=A2-A1。
GOD 活力單位的計算
1、血清(漿)GOD 活力的計算
單位定義:每 mL 血清(漿)每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=3333×ΔA
2、動物組織 GOD 活力的計算
(1)按蛋白濃度計算
單位定義:每 mg組織蛋白每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr)÷T
=3333×ΔA÷Cpr
 
 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOD)試劑盒說明書
(2)按樣本鮮重計算
單位定義:每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 氧化型鄰聯茴香胺為一個酶活力單位。
GOD(nmol/min/ g鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T
=3333×ΔA÷W
V 反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:氧化型鄰聯茴香胺摩爾消光系數,7.5×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.04 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間,1 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
 
發布者:上海一基實業有限公司一部
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