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Western Blot實驗相關試劑的配制

瀏覽次數:6848 發布日期:2016-5-30  來源:南京厚百電子商務有限公司

30%(w/v)丙烯酰胺溶液  

丙烯酰胺             29g

甲叉雙丙烯酰胺       1g

加去離子水,定容至 100ml 調整溶液 pH 值不超過 7.0,置棕色瓶中貯存于室溫或4℃。 

10%SDS 

SDS                    10g

蒸餾水至             100ml

50℃ 水浴下溶解,室溫保存。如在長期保存中出現沉淀,水浴溶化后,仍可使用。

1.5mol/L Tris·HCl (pH8.8)

Tris (MW121.14)      45.43g

超純水              200ml

溶解后,用濃鹽酸調pH至8.8,最后用超純水定容至250ml,室溫下保存。

0.5mol/L Tris·HCl (pH6.8)

Tris (MW121.14)      15.14g

超純水            200ml

溶解后,用濃鹽酸調pH至6.8,最后用超純水定容至250ml,室溫下保存。

10% 過硫酸胺(AP)

過硫酸胺             0.1g

超純水               1.0ml

溶解后,4℃避光保存,保存時間為1周。(可先將過硫酸胺干粉稱好分量后放在EP管中,一次性多裝幾管,使用時加入超純水即可) 

20%Tween20  

Tween20             20ml

蒸餾水至             100ml

混勻后4℃保存。

1.74mg/ml (10mmol/L)PMSF

PMSF                 0.174g

異丙醇                100ml

溶解后,分裝于1.5ml離心管中,-20℃保存。

單去污劑裂解液(PMSF)

1mol/L Tris·HCl (pH8.0)    2.5ml

NaCl                                0.438g

TritonX-100                           0.5ml

蒸餾水至                                50ml

混勻后4℃保存。使用時,加入PMSF至終濃度為100μg/ml(0.87ml裂解液加入1.74mg/ml PMSF50μl)。

RIPA裂解配方

50 mM Tris-HCl pH 7.4

150 mM NaCl

1 mM PMSF (用前加)

1 mM EDTA

1% Triton x-100

1% 脫氧膽酸鈉

0.1% SDS

G250 考馬斯亮藍溶液 (蛋白定量專用)

考馬斯亮藍G250      100mg

95%乙醇             50ml

磷酸                      100ml

蒸餾水至              1000ml

配制時,先用乙醇溶解考馬斯亮藍染料,再加入磷酸和水,混勻后,用濾紙過濾,4℃保存。

100mg/ml 牛血清白蛋白(BSA)

BSA                           0.1g

0.15 mol/L NaCl                   1ml

溶解后-20℃保存。制作蛋白標準曲線時,用0.15 mol/L NaCl進行100倍稀釋成1mg/ml,-20℃保存。

還原型 5XSDS 上樣緩沖液  

0.5 mol/L Tris·HCl (pH6.8)    2.5ml

二硫叔糖醇(DTT,MW154.5)      0.39g

SDS                             0.5g

溴酚藍                          0.025g

甘油                            2.5ml

混勻后,分裝于 1.5ml 離心管中,4℃保存。

電泳液緩沖液    

Tris (MW121.14)          3.03g

甘氨酸(MW75.07)        18.77g

SDS                            1g

蒸餾水至                     1000ml

溶解后室溫保存,次溶液可重復使用 3~5 次。

(電泳液可以回收重復利用,一般將回收的電泳液加入垂直電泳槽的下半部分,上半部分最好使用新鮮的電泳緩沖液)

(可以配制成 10×電泳緩沖液進行保存,稀釋 10 倍使用)

轉移緩沖液    

半干

24mmol/L Tris (MW:121.14)     1.4536 g

192mmol/L  甘氨酸(MW:75.07) 7.20672 g

20 %甲醇                        100 ml

蒸餾水至                         500ml

浸漬(濕轉)

48mmol/L Tris             2.375g

39mmol/L 甘氨酸           11.25g

20 %甲醇                  200ml

0.0375%SDS            0.375g

蒸餾水至                  1000 ml

溶解后室溫保存,次溶液可重復使用 3~5 次(次溶液最好保存在 4 度冰箱,最多使用 5 次左右,不然影響轉移效率)。(先用蒸餾水溶解甘氨酸、Tris 和 SDS,然后再加入甲醇,最后補足液體。如果先加入甲醇,溶解甘氨酸、Tris 和 SDS 等比較困難)

(可以配制成 2×轉移緩沖液進行保存,稀釋后使用)

10X 麗春紅染液  

麗春紅 S         2g

三氯乙酸        30g

磺基水楊酸      30g

蒸餾水至         100ml

TBS 緩沖液 

1 mol/L Tris·HCl (pH7.5) 10ml

NaCl                        8.8g

蒸餾水至                    1000ml

(可以配制成 10×TBS 緩沖液進行保存,稀釋 10 倍使用)

TBST 緩沖液       

20 %Tween20        1.65ml

TBS                700ml

混勻后即可使用,最好現用現配。

封閉液       

脫脂奶粉(國產)             5g 

TBST                         100ml

最好現用現配。

洗脫抗體緩沖液  

14.4 mol/L β-巰基乙醇                  700μl(通風廚里加)

SDS                                                  2g

0.5mol/L Tris·HCl (pH6.8)                   12.5ml

超純水至                                           100ml

配制時,在通風廚內進行。4℃保存。可重復使用 1 次。(可用可不用)

發布者:南京厚百電子商務有限公司
聯系電話:025-52333444
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