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木質(zhì)素含量檢測試劑盒微量檢測方法

瀏覽次數(shù):1669 發(fā)布日期:2021-8-11  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體 34mL×1 瓶,4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。試劑二:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。

微量法
 
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,50mg 木質(zhì)素,4℃保存。臨用前加入 1mL 高氯酸,充分混勻溶解,配成50mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。

產(chǎn)品說明:

木質(zhì)素是構(gòu)成植物細(xì)胞壁的成分之一,具有使細(xì)胞相連的作用。木質(zhì)素存在于木質(zhì)組織中,主要作用是通過形成交織網(wǎng)來硬化細(xì)胞壁,為次生壁主要成分。

木質(zhì)素中的酚羥基發(fā)生乙酰化后在 280nm 處有特征吸收峰,280nm 的吸光值高低與木質(zhì)素含量正相關(guān)。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、玻璃管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸餾水。

操作步驟:

一、樣品處理:

樣品 80℃烘干至恒重,粉碎,過 40  目篩,稱取約 3mg 于 1.5mLEP 管中。

二、測定步驟:

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 280nm,冰乙酸調(diào)零。

2、操作表:在玻璃管中依次加入下列試劑:
 
  測定管 標(biāo)準(zhǔn)管 空白管
樣品(mg) 3 - -
試劑一(µL) 300 300 300
高氯酸(µL) 12 - 12
標(biāo)準(zhǔn)液(µL) - 12 -
封口膜密封,充分混勻。于 80℃水浴鍋水浴 40min,進(jìn)行乙酰化。每隔 10min 震蕩一次,
然后自然冷卻。
試劑二(µL) 300 300 300
充分混勻后于常溫 8000g 離心 10min,取上清。
上清液(µL) 12 12 12
 
冰乙酸(µL) 588 588 588
測定 280nm 下的吸光值 A,記為 A 測定管、A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管,計(jì)算△A=A 測定管-A 空白管、△A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

三、木質(zhì)素含量計(jì)算:
 
C 標(biāo)準(zhǔn)=C 原液×V 標(biāo)準(zhǔn)÷V 乙酰化×V 上清÷V 檢測=0.0196 mg/mL

木質(zhì)素(mg/g)= △A÷(△A 標(biāo)準(zhǔn)÷C 標(biāo)準(zhǔn))×V 檢測÷(W×V 上清÷V 乙酰化)
= 0.5998×△A÷△A 標(biāo)準(zhǔn)÷W
 
C 標(biāo)準(zhǔn):標(biāo)準(zhǔn)液在最終檢測體系中的濃度,0.0196 mg/mL;C 原液:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,50mg/mL;V 標(biāo)準(zhǔn):加入的標(biāo)準(zhǔn)液的體積,0.012mL;V 乙酰化:乙酰化反應(yīng)體積,0.612mL;V 上清:上清液體積,0.012mL;V 檢測:檢測反應(yīng)總體積,0.6mL;W:樣本質(zhì)量,g。
發(fā)布者:上海仁捷生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-60346444
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