注   意 ：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：
LPS又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS廣泛的存在于各種生物中。血清中LPS的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。 

測定原理：
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算LPS活性。

自備儀器和用品：
研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、甲苯100mL、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：
試劑一：液體90mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體14mL×1瓶，4℃保存。每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。
試劑三：甲苯100mL×1瓶，4℃保存（自備）。
試劑四：液體20mL×1瓶，4℃保存。
標準品：液體10μL×1瓶，10 µmol/mL的標準溶液，4℃保存。臨用前加入3.168 mL甲苯，充分溶解。

粗酶液提取：

• 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。12000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
• 細菌、真菌：按照細胞數量（10⁴個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后12000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。
• 血清等液體: 直接檢測。

LPS測定操作：

• 分光光度計預熱30 min以上，調節波長到710 nm，蒸餾水調零。
• 試劑一和試劑二置于37℃水浴預熱30min以上。
• 在5mL EP管中依次加入下列試劑

 

試劑名稱（μL）	空白管	測定管
蒸餾水	375
樣本		125
試劑一	750	750
試劑二		250

試劑三

2000

2000

試劑名稱（μL）	空白管	測定管	標準管
上清液	1200	1200

標準品			1200
試劑四	300	300	300

LPS活性計算公式：
1. 組織、細菌或細胞LPS活性
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/mg prot) = [C標準品×(A測定管-A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷（Cpr×V樣）÷T=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]÷Cpr
（2）按照樣本質量計算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol/min/g 鮮重) = [C標準品×(A測定管-A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷（W×V樣÷V樣總）÷T=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]÷W
（3）按照細菌或者細胞數量計算
活性單位定義：37℃中每10⁴個細胞每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/10⁴cell) = [C標準品×(A測定管-A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷（細胞數量×V樣÷V樣總）÷T=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]÷細胞數量
2. 血清等液體LPS活性
活性單位定義：37℃中每毫升血清每分鐘水解橄欖油生成1μmol脂肪酸為一個酶活單位。
LPS (μmol /min/mL) = [C標準品×(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]×V反總÷V樣÷T
=16×[(A測定管－A空白管)÷（A標準管- A空白管）]
C標準品：10 µmol/mL；V反總：反應總體積，2mL；V樣：反應中加入樣本體積，0.125mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質濃度，mg/mL，需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒；W：樣本質量，g；T：催化反應時間，10 min。