翻譯后修飾蛋白組分析
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蛋白質翻譯后修飾(PTMs)是指蛋白質在翻譯中或翻譯后的化學修飾過程。蛋白質翻譯后修飾(PTMs)通過給蛋白質添加磷酸酯、乙酸酯、酰胺基或甲基等官能團增加蛋白質組的功能多樣性,并影響正常細胞生物學和發病機理的幾乎所有方面。蛋白質翻譯后修飾在許多細胞過程中起著關鍵作用,如細胞分化、蛋白質降解、信號傳導和調節過程、基因表達調節以及蛋白質相互作用。蛋白質翻譯后修飾PTMs通常包括磷酸化、糖基化、泛素化、亞硝基化、甲基化、乙酰化、脂質化和蛋白水解。因此,PTM的特征(包括修飾類別和修飾位點)在細胞生物學以及疾病診斷和預防研究中至關重要。
蛋白質翻譯后修飾(PTMs)受許多因素影響,鑒定過程比較繁瑣。例如:大多數翻譯后修飾水平很低。因此,在鑒定之前必須對修飾蛋白進行富集。此外,修飾的穩定性以及質譜的檢測效率也是PTMs分析過程中的關鍵因素。百泰派克生物科技搭建有高級的分析平臺,可用于表征各種翻譯后修飾(PTM)。
BTP-蛋白質翻譯后修飾鑒定能夠解決的生物學問題百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質譜平臺,Orbitrap Fusion質譜平臺,Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,為廣大科研工作者提供磷酸化/糖基化/泛素化/乙;/甲基化/二硫鍵/亞硝基化等翻譯后修飾鑒定。
蛋白質氨基酸序列的特定位置可以與化學基團或者小分子量的蛋白共價結合從而發生蛋白質翻譯后修飾(post-translational modifications,PTMs),相較于沒有發生修飾的蛋白,PTMs會導致特定序列分子量的增加。在蛋白翻譯后修飾方式的鑒定過程中,蛋白會首先被酶切成肽段,然后進入質譜進行分析;通過質譜分析,得到的是一系列肽段的分子質量信息。對于某一個特定肽段而言,在沒有發生任何翻譯后修飾的情況下,其序列信息和分子量是確定的;
蛋白質翻譯后修飾方式鑒定示意圖
當它發生了某種翻譯后修飾之后,例如磷酸化修飾,由于序列信息和分子量是確定的,磷酸根的分子量也是確定的;在質譜檢測過程中發現其中的部分肽段的分子量剛好增加了一個磷酸根的分子量,假設這個肽段就發生了磷酸化修飾,再通過二級質譜圖進行二次確認。
各類PTMs的常見功能PTMs的常見功能
該項目是中國科學院生物物理所一位老師Co-IP樣品在百泰派克進行蛋白泛素化修飾位點鑒定。得到的部分結果如下圖所示:
蛋白質翻譯后修飾方式鑒定研究案例