豬乙型腦炎病毒（Japanese Encephalitis Virus, JEV）屬于黃病毒科黃病毒屬，是一種引起豬繁殖障礙和人乙型腦炎的重要病原體。其病毒蛋白的結構與功能在病毒感染機制、疫苗研發及診斷中具有關鍵作用。以下從病毒蛋白組成、關鍵蛋白特性、應用價值等方面詳細解析：

一、JEV 的病毒結構與蛋白組成
病毒特性：JEV 為單股正鏈 RNA 病毒，基因組約 11kb，核衣殼呈二十面體對稱，外被脂質囊膜。病毒顆粒直徑約 40-60nm，主要感染豬（尤其是仔豬和妊娠母豬），引起睪丸炎、流產、死胎等繁殖障礙，同時可通過蚊蟲叮咬傳播給人類，導致乙型腦炎（腦炎型疾病）。
蛋白組成：JEV 基因組編碼 3 種結構蛋白和 7 種非結構蛋白：
結構蛋白：衣殼蛋白（C）、前膜蛋白（prM/M）、包膜蛋白（E）—— 其中E 蛋白是最關鍵的抗原蛋白，決定病毒的宿主嗜性、中和抗原性及膜融合功能。
非結構蛋白：NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5—— 主要參與病毒復制、蛋白加工及免疫逃逸。

二、關鍵結構蛋白的特性與功能
1. 包膜蛋白（E 蛋白）
結構與分子量：
E 蛋白是 JEV 囊膜表面的主要糖蛋白，由 500-515 個氨基酸組成（不同毒株略有差異），分子量約 53-58 kDa，含 1-2 個 N - 糖基化位點（如 Asn290、Asn307），糖基化可影響病毒的抗原性和感染性。
三維結構：E 蛋白單體由 3 個結構域（Domain I、II、III）組成：
Domain I：中央結構域，呈 β 桶狀，為二聚體形成的核心；
Domain II：延伸的融合環結構域，含保守的組氨酸（His）和半胱氨酸（Cys）殘基，參與病毒與宿主細胞膜的融合；
Domain III：免疫球蛋白樣結構域，是受體結合的關鍵區域，也是中和抗體的主要靶點（如 E 蛋白第 304-315 位氨基酸構成的表位）。
功能：
介導病毒與宿主細胞表面受體（如低密度脂蛋白受體 LDLR、黏附分子等）的結合；
參與病毒 - 宿主膜融合，促進病毒基因組釋放；
誘導宿主產生中和抗體和細胞免疫，是疫苗研發的核心抗原。
2. 前膜蛋白（prM/M 蛋白）
結構與加工：
prM 蛋白由 166 個氨基酸組成，分子量約 20 kDa，在病毒成熟過程中被宿主蛋白酶切割為 M 蛋白（分子量約 8 kDa）。
prM 蛋白在未成熟病毒顆粒中與 E 蛋白結合，穩定 E 蛋白的二聚體構象，防止其在酸性環境中提前融合；成熟病毒中，prM 被切割為 M 蛋白，形成 E 蛋白 - M 蛋白復合物。
功能：
參與病毒顆粒的組裝與成熟，維持病毒結構穩定性；
M 蛋白可增強 E 蛋白的免疫原性，部分研究顯示 prM/M 蛋白與病毒的神經侵襲性相關。
3. 衣殼蛋白（C 蛋白）
特性：C 蛋白由 123-132 個氨基酸組成，分子量約 14 kDa，為堿性蛋白，富含精氨酸和賴氨酸，可與病毒 RNA 結合形成核衣殼。
功能：
包裹病毒基因組 RNA，形成核衣殼核心；
參與病毒復制復合體的形成，調控病毒 RNA 的復制；
部分研究表明 C 蛋白可通過與宿主細胞蛋白互作（如抑制 IFN-β 信號），促進病毒免疫逃逸。

三、非結構蛋白的功能（簡要）
NS1：分子量約 46 kDa，以二聚體形式存在，參與病毒 RNA 復制，同時可作為分泌型抗原，誘導宿主產生非中和抗體（可用于診斷）。
NS3：兼具蛋白酶和螺旋酶活性，參與病毒多聚蛋白的切割及 RNA 復制。
NS5：RNA 依賴的 RNA 聚合酶（RdRp），是病毒復制的關鍵酶，也是抗病毒藥物的潛在靶點。

四、JEV 蛋白在疫苗研發中的應用
1. 傳統疫苗中的蛋白抗原
滅活疫苗：以 JEV 全病毒（如 P3 株、SA14 株）經滅活后制備，包含 E、prM/M、C 等結構蛋白，可誘導中和抗體，但存在生產過程中活病毒操作的生物安全風險，且免疫保護期較短。
減毒活疫苗：如 SA14-14-2 株，通過基因突變減弱毒力，保留完整蛋白抗原，免疫原性強，一針免疫即可誘導持久保護，但存在返祖或神經毒力恢復的潛在風險。
2. 基因工程亞單位疫苗
重組 E 蛋白疫苗：
通過原核（如 E. coli）、酵母、昆蟲細胞（桿狀病毒系統）或哺乳動物細胞表達 JEV E 蛋白（尤其是 Domain III），作為亞單位抗原。
例：昆蟲細胞表達的 E 蛋白可形成可溶性二聚體，免疫豬后可誘導高效中和抗體，且安全性高（無感染性）。
病毒樣顆粒（VLPs）疫苗：
表達 prM/M 和 E 蛋白，在真核細胞中自組裝形成 VLPs（不含病毒核酸），結構類似天然病毒，免疫原性強，無需佐劑即可激發體液免疫和細胞免疫，是當前 JEV 疫苗研發的熱點（如基于桿狀病毒系統的 VLPs 疫苗已在動物實驗中驗證效果）。
3. 新型疫苗（如 DNA 疫苗、病毒載體疫苗）
將 JEV E 蛋白基因插入質粒 DNA 或病毒載體（如腺病毒、痘病毒），通過肌肉注射或黏膜免疫誘導體內表達 E 蛋白，激發免疫應答。例如，E 蛋白 DNA 疫苗在豬模型中可誘導中和抗體，并保護其免受 JEV 攻擊。

五、JEV 蛋白在診斷中的應用
1. 抗體檢測
間接 ELISA：以重組 E 蛋白或 NS1 蛋白作為包被抗原，檢測豬血清中的 JEV 特異性抗體（IgG、IgM），用于流行病學調查或免疫效果評估。
優勢：E 蛋白抗原特異性高，可區分免疫豬與自然感染豬（若結合 NS1 抗體檢測，因滅活疫苗不含 NS1 蛋白，自然感染豬可產生 NS1 抗體）；
例：使用 NS1 蛋白建立的 ELISA 方法，可檢測豬感染 JEV 后產生的非中和抗體，輔助診斷急性感染。
2. 抗原檢測
RT-PCR 聯合蛋白檢測：通過檢測 JEV RNA（如 NS5 基因）結合 E 蛋白免疫熒光（IF）或免疫組化（IHC），對病死豬腦組織、脾臟等器官中的病毒抗原進行定位和定性，用于確診 JEV 感染。

六、JEV 蛋白的結構研究與抗病毒藥物開發
E 蛋白結構解析：通過冷凍電鏡（cryo-EM）解析 JEV E 蛋白二聚體及與中和抗體的復合物結構，可指導疫苗抗原表位優化（如設計高保守中和表位）和抗病毒藥物研發（如靶向 E 蛋白融合環的小分子抑制劑）。
NS5 蛋白抑制劑：針對 NS5 的 RdRp 活性位點設計核苷酸類似物（如利巴韋林的衍生物）或非核苷酸抑制劑，阻斷病毒 RNA 復制，部分化合物已在細胞模型中顯示抗病毒活性。

七、總結
豬乙型腦炎病毒的蛋白組成（尤其是 E 蛋白）是其感染機制和宿主免疫應答的核心靶點。E 蛋白的結構特性（受體結合域、融合功能域、中和表位）使其成為疫苗研發的關鍵抗原，從傳統滅活 / 減毒疫苗到新型 VLPs 疫苗、DNA 疫苗，均以 E 蛋白為基礎優化免疫原性和安全性。同時，非結構蛋白（如 NS1）在診斷中的應用及結構蛋白的功能研究，為 JEV 的精準防控（如疫苗設計、藥物開發）提供了多維度的科學依據。未來，結合結構生物學、反向遺傳學及基因工程技術，深入解析 JEV 蛋白與宿主的互作機制，將推動更高效的疫苗和抗病毒策略的發展。