抗體熱穩(wěn)定性測定是確定抗體在升溫過程中的穩(wěn)定性，識別其熱變性溫度（Tm），即抗體開始失去結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性的溫度點，以及評估在特定溫度下的長期穩(wěn)定性。抗體的熱穩(wěn)定性直接影響其生物學(xué)活性和功能性，對于藥物開發(fā)、診斷試劑和研究應(yīng)用而言至關(guān)重要。

圖1

二、常用方法

1.差示掃描量熱法（DSC）：

• 原理：測量在加熱過程中，樣品與參照物之間的熱流差異，以確定抗體蛋白質(zhì)的熱變性溫度。
• 應(yīng)用：準(zhǔn)確地評估抗體的熱穩(wěn)定性和變性溫度，適用于抗體工程和配方開發(fā)。

2.圓二色光譜（CD）分析：

• 原理：利用蛋白質(zhì)在特定波長下的圓偏光吸收差異，來監(jiān)測蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的變化。
• 應(yīng)用：評估抗體在不同溫度下的結(jié)構(gòu)變化，了解其穩(wěn)定性特性。

3.表面等離子共振（SPR）：

• 原理：監(jiān)測抗體與特定抗原結(jié)合的親和力變化，來評估溫度對其功能性的影響。
• 應(yīng)用：分析抗體在不同溫度條件下的功能穩(wěn)定性。

4.熒光光譜法：

• 原理：通過測定蛋白質(zhì)內(nèi)部色氨酸和酪氨酸殘基的熒光強(qiáng)度變化，監(jiān)測蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的變化。
• 應(yīng)用：快速評估抗體的熱穩(wěn)定性，適用于初步篩選和比較不同抗體或配方的穩(wěn)定性。

5.動態(tài)光散射（DLS）：

• 原理：測量抗體溶液中粒子大小分布的變化，以評估溫度對其聚集狀態(tài)的影響。
• 應(yīng)用：了解抗體在不同溫度條件下的聚集趨勢。

實驗設(shè)計考慮因素

• 樣品準(zhǔn)備：確保抗體樣品的純度和濃度適合所選的分析方法。
• 溫度范圍：選擇覆蓋抗體可能穩(wěn)定和不穩(wěn)定區(qū)域的溫度范圍。
• 數(shù)據(jù)分析：利用適當(dāng)?shù)能浖�和統(tǒng)計方法，準(zhǔn)確解讀實驗數(shù)據(jù)，得出有意義的結(jié)論。