全組織細(xì)胞色素氧化酶活性染色試劑盒使用說明

瀏覽次數(shù)：2560　發(fā)布日期：2017-7-31　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

全組織細(xì)胞色素氧化酶活性染色試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

全組織細(xì)胞色素氧化酶活性染色試劑是一種旨在使用細(xì)胞色素C催化人工電子供體染料二氨基聯(lián)苯胺的非酶源性自然氧化，形成棕褐色不溶性產(chǎn)物，來分析全組織樣品中細(xì)胞色素氧化酶活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心改良傳統(tǒng)NADI方法、成功實驗證明的。主要適用于各種動物組織的細(xì)胞色素氧化酶活性的定性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定，顯色清晰。

技術(shù)背景

細(xì)胞色素氧化酶（Cytochrome oxidase）是氧化呼吸鏈的酶部分的總稱。其存在于真核生物的細(xì)胞線粒體上，主要通過氧化磷酸化為細(xì)胞提供能量。二氨基聯(lián)苯胺（3,3’-diaminobenzidine，DAB）是人工電子供體染料，通過與金屬蛋白，例如含鐵蛋白細(xì)胞色素C中的物理性結(jié)合，產(chǎn)生非酶源性自然氧化，同時提供電子（細(xì)胞色素C作為電子受體）于呼吸鏈的電子傳遞系統(tǒng)，由此呈現(xiàn)出顏色變化和沉積，形成棕褐色不溶性產(chǎn)物，且不受乙醇影響。在DAB自然氧化的同時，產(chǎn)生活性氧，例如過氧化氫，由過氧化氫酶防止其聚集。在大量氧化型DAB的存在下，通過細(xì)胞色素氧化酶的作用，亞鐵細(xì)胞色素C被氧化成正鐵細(xì)胞色素C。由此氧化型DAB棕褐色不溶性產(chǎn)物被用于檢測組織細(xì)胞中細(xì)胞色素氧化酶的活性。

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A） 200毫升

染色液A（Reagent B1） 40毫升

染色液B（Reagent B2） 4瓶

反應(yīng)液（Reagent C） 3毫升

固著液（Reagent D） 30毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存染色液（Reagent B）和反應(yīng)液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器

培養(yǎng)箱：用于反應(yīng)孵育

中性樹脂：用于切片封片

光學(xué)顯微鏡：用于切片染色后觀察分析

實驗步驟

染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取9毫升染色液A（Reagent B1）到1瓶染色液B（Reagent B2）里，混勻，標(biāo)記為染色工作液，置于冰槽里備用，避免光照（注意：有效期1周）；繼續(xù)移取2.7毫升染色工作液到新的1.5毫升離心管，加入300微升反應(yīng)液（Reagent C），混勻后，標(biāo)記為反應(yīng)工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進行下列操作。