【摘要】  目的 不同濃度VG 氏染色液對細胞培養后的染色效果的研究，尋求理想的配置濃度。方法 大鼠肝星狀細胞（HSC-T6）培養，細胞爬片，經乙醛刺激細胞活化后，通過HE、VG 氏染色，觀察膠原纖維和肌源性成分的染色效果。結果 VG染液：A液（1%酸性品紅水溶液）、B液（苦味酸飽和水溶液），臨用前分別按A∶B=2∶1、1∶1、1∶2三種配方中肌性纖維和膠原纖維都染成不同程度的品紅色。A∶B=1∶9配方中肌性纖維染成黃色，膠原纖維染成紅色。A∶B=5∶95、1∶99配方中兩者都染成黃色。結論 A∶B=1∶9此種染色兩種成分明顯，效果最佳,其余比例染色效果呈單一色，無鑒別作用。

【關鍵詞】  VG染色；細胞培養；肝星狀細胞；膠原纖維

    VG氏(Van Giesan)染色方法在病理診斷中是最常應用的一種特殊染色，鑒定膠原纖維和肌源性成分起著重要的作用［1］。但是對細胞染色的研究報道很少，本文對不同濃度VG 氏染色液對細胞培養后的染色效果進行探討，尋求理想的配置濃度。

　　1  材料與方法

　　1.1  材料

　　細胞來源于瀘州醫學院中心實驗室的大鼠肝星狀細胞（HSC-T6），正常細胞培養再經乙醛刺激24h，95％的酒精固定。VG染液：A液（1%酸性品紅水溶液）、B液（苦味酸飽和水溶液）；HE染液均由該實驗中心提供。

　　1.2 方法

　　1.2.1  細胞培養 
　　
　　大鼠肝星狀細胞（HSC-T6）經10%胎牛血清DMEM培養基正常傳代培養穩定后，細胞爬片，長至融合度70%時，0.4%胎牛血清DMEM培養基同步化處理12h，200uM乙醛刺激24h, 95％的酒精固定。

　　1.2.2  染色

　　HE染色5～10min，稀鹽酸酒精進行分色，淡氨水使胞核藍化3～5min，用VG染液染5～10min。棄去染液，直接用95% 酒精快速分化，用濾紙吸干。二甲苯透明，中性樹膠封固。VG染液：A液（1%酸性品紅水溶液）、B液（苦味酸飽和水溶液），臨用前分別按A∶B=2∶1、1∶1、1∶2、1∶9、5∶95、1∶99的比例混合使用。

　　2  結 果

    通過對國內外染液配制比例配方中選出有代表性的6種進行染色比較，可以看出A∶B=2∶1、1∶1、1∶2三種配方中肌性纖維和膠原纖維都染成不同程度的品紅色（見圖1、2），無差異性，起不到鑒別的作用。A∶B=1∶9配方中肌性纖維染成黃色，膠原纖維染成紅色（見圖3），此染色效果最佳。A∶B=5∶95配方中肌性纖維和膠原纖維都染成不同程度的黃色（見圖4）。A∶B=1∶99配方中兩者都染成黃色。故由此認為A∶B=1∶9配方染色效果最佳。

　　3  討  論

    肝纖維化其特征為以膠原蛋白為主的細胞外基質(extracellular matrix, ECM)合成與降解失衡。肝星狀細胞(hepatic stellate cells, HSC)是引起肝纖維化的主要細胞［2］ ，其活化、增殖是肝纖維化的關鍵事件［3］。 激活的HSC大量增殖, 發生表型改變并分泌過多的ECM沉積于肝臟是肝纖維化形成的關鍵［4］。酒精的代謝產物乙醛能夠有效刺激HSC活化，使P-ERK水平增加，引起ERK信號傳導通路活化［5］。膠原纖維是結締組織的一種組成成分，由成纖維細胞所產生，易被酸性染料著色。Van Gieson作為傳統的膠原纖維染色方法之一，其配方中酸性品紅用于染膠原纖維，而苦味酸能使肌纖維黃染，染色效果鮮艷明亮，且本法不受組織固定液的限制，因而深受科學研究歡迎。本文中試探將Van Gieson染液中兩種染料按不同比例組成配方使用，目的在于探索能否根據不同組織選用不同比例配方達到不同的染色效果。經過我們反復比較試驗，按1%酸性品紅1份與9份苦味酸飽和水溶液混合配制而成的Van Gieson染液，染色結果膠原纖維與肌纖維顏色鮮艷且對比明顯。另外，蘇木精為組織學技術中常用的細胞核優良染料，但蘇木精單獨使用并沒有染色作用，我們對比使用不同蘇木素染液目的在于找尋一種用于Van Gieson染色法的細胞核染液，該染液染色后不易被苦味酸褪掉。實驗結果并結合以上分析，使用Van Gieson染色法，若將酸性品紅與苦味酸按1∶9比例配制染液，并用含鐵的蘇木素染液染細胞核，可獲得較為穩定的操作方法，且可使肌纖維、膠原纖維、細胞核的顏色對比更為突出。也可根據需要選用其他比例的Van Gieson染液。