牛呼吸綜合癥病毒抗體elisa試劑盒使用說明書

 

隨著熒光定量PCR技術(shù)的成熟和熒光定量PCR儀的普及，用傳統(tǒng)的半定量方法檢測目的基因表達量的升高或者降低，已經(jīng)遠遠不能滿足當前科研的需要，針對當前研究的熱點基因，閃晶生物及時地從美國biosuper公司引進不同物種、不同基因的熒光定量PCR檢測試劑盒。該試劑盒包含了目的基因和內(nèi)參基因的引物、taqman探針(熒光探針)、反轉(zhuǎn)錄試劑、熒光定量PCR試劑、操作說明書等，用戶只需將提好的RNA加入就可以進行熒光定量PCR實驗，操作方便簡單、適合多種熒光定量PCR儀，同時也避免了自己設(shè)計、合成引物探針的煩惱。目前主要是人、大鼠、小鼠的大部分基因，其它物種的基因需來電或來信咨詢。

牛elisa試劑盒使用目的：
　　本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關(guān)液體樣本中呼吸綜合癥病毒抗體含量。

牛elisa試劑盒實驗原理
　　本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中牛呼吸綜合癥病毒抗體水平。用純化的牛呼吸綜合癥病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入呼吸綜合癥病毒抗體，再與HRP標記的呼吸綜合癥病毒抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呼吸綜合癥病毒抗體呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中牛呼吸綜合癥病毒抗體濃度。

牛elisa試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（32pg/ml） 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
16pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
8pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
4pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
2pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。