Q1:蛋白從頭測序與Edman 降解法測序列有什么區(qū)別？

A:蛋白從頭測序應用de novo從頭測序算法，直接通過質(zhì)譜譜圖中的離子信息來推導肽段的序列。Edman 降解法一般適合15-20個氨基酸組成的肽段，且對于樣品純度要求也比較高，至少97%純度以上；同時還要進行蛋白酶解、肽段分離純化和肽段逐一上機測試，另外，對于一個單抗進行Edman降解測序的時間成本和經(jīng)濟成本也比較高。

與傳統(tǒng)的Edman降解法相比。基于質(zhì)譜的de novo從頭測序更加高效率、高通量和低成本。在已知蛋白氨基酸序列的情況下，de novo從頭測序還可以發(fā)現(xiàn)新的蛋白變體，這些變體可能來自于未知的突變，剪切拼接和各種翻譯后修飾，為單抗序列提供更全面的信息。

Q2:蛋白從頭測序的樣品類型有哪些？

A:蛋白從頭測序和蛋白的大小長度無關，單抗、Fab/Fc、雙抗、多抗、重組蛋白、多肽、熒光標記抗體、交聯(lián)抗體等均可以進行從頭測序。

Q3:熒光標記或者交聯(lián)抗體能夠做從頭測序嗎？

A:蛋白交聯(lián)在Beads上或者是熒光標記的蛋白如流式抗體FITC、Cyc5、PE等標記的抗體也是能夠進行從頭測序的。

Q4:蛋白從頭測序的送樣要求是什么？

A:蛋白從頭測序標準的送樣量是100ug，純度是90%以上，有最低20ug測序成功的經(jīng)驗。蛋白純度對測序結(jié)果的影響較大，雜的抗體蛋白、同源蛋白及BSA等會對樣品測序產(chǎn)生干擾，從而影響實驗結(jié)果。

Q5:樣品buffer成分對測序結(jié)果有影響嗎？

A:蛋白溶解緩沖液標準的送樣建議是使用PBS或Tris緩沖液體系，此外如果有甘油、BSA、去垢劑、鹽等成分，我們會有相應的方法做一些純化處理，所以是不影響測序結(jié)果的。

Q6:樣品糖基化和翻譯后修飾會影響測序嗎？

A:數(shù)據(jù)分析時會將可能的翻譯后修飾和糖基化修飾考慮在內(nèi)，不影響樣品本身測序結(jié)果。

Q7:蛋白從頭測序使用的儀器？

A:目前，我們使用的是賽默飛的三合一超高分辨質(zhì)譜儀，型號為Orbitrap Fusion或者Orbitrap Eclipse。隨著質(zhì)譜技術的發(fā)展，百蓁技術平臺將會陸續(xù)引進更多高端新儀器，為廣大客戶帶來更優(yōu)質(zhì)的服務。

Q8:蛋白從頭測序的報告內(nèi)容？

A: ①完整的蛋白氨基酸序列，抗體包括重鏈和輕鏈序列，恒定區(qū)和可變區(qū)。

    ②完整分子量驗證信息，將實際測得的分子量與理論序列分子量進行比對來驗證序列的準確性。

    ③完整序列的肽段覆蓋圖，每個位點的氨基酸有超過十種不同的肽段支持。

    ④抗體可變區(qū)肽段的二級質(zhì)譜圖支撐。

    ⑤I/L鑒定的可信度分析。

Q9:蛋白從頭測序結(jié)果的準確度如何？

 A:①測序結(jié)果保證全序列覆蓋和100%序列準確，每個位點的氨基酸有超過十種不同的肽段支持，每個氨基酸在質(zhì)譜圖里有強的碎片離子峰證據(jù)。測序結(jié)果結(jié)合軟件算法和人工檢驗，雙重保證序列準確性。

   ②百蓁生物創(chuàng)始人李明院士是蛋白從頭測序算法的主要發(fā)明人，PEAKS系列軟件更是行業(yè)從頭測序的金標準，百蓁生物母公司BSI在從頭測序領域有20多年的經(jīng)驗積累，一直以來為國內(nèi)外眾多制藥企業(yè)提供專業(yè)的測序服務，測序方法經(jīng)得住時間的考驗。

Q10:蛋白從頭測序的周期是多久？

A: 符合送樣要求，從開始檢測到報告發(fā)送標準的服務周期是一周。