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胎牛血清( FBS)存放與解凍方法分析

瀏覽次數:1832 發布日期:2024-10-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是一種廣泛應用于細胞培養領域的生物制品,具有豐富的營養成分和生物活性物質,能夠支持細胞生長、分化和維持正常生理功能。胎牛血清是通過對未出生胎牛穿刺采血,經過自然層析、離心、微濾等處理得到的上清液。主要成分包括蛋白、因子、激素等,具有提供營養、促進生長、保護細胞等功能。使用時需正確儲存、解凍和配制,避免反復凍融和靜置過久。

胎牛血清的主要成分:

①各種蛋白:白蛋白、球蛋白、纖連蛋白、轉鐵蛋白等;
②因子:各種生長因子等;
③各種激素:胰島素、促生長激素、氫化可的松等;
④其他微量元素、維生素、離子等;
⑤不明確的成分:由于胎牛血清是天然生物制品,FBS中還存在部分不明確的生物成分。

胎牛血清的主要功能:

①提供營養:胎牛血清中的各種蛋白可提供細胞分裂所需的營養物質
②促進生長:胎牛血清中的各種生長因子和激素可促進細胞生長
③保護細胞:胎牛血清帶有一定粘稠度,且有酸堿緩沖液的作用,可保護細胞
④提供蛋白酶抑制劑:提供蛋白酶抑制劑,中和剩余的胰蛋白酶的消化,保護細胞
⑤提供貼壁因子:胎牛血清提供貼壁因子,是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子的來源。

胎牛血清的正確存放與解凍是各位實驗家尤為關注的一個問題,經過專業人員從其成分中分析,在保證質量的前提下,胎牛血清的正確存放與解凍的方法,總結如下:

 
1、保存血清最好的方法?

我們建議血清應保存在-5℃至-20℃。然而,若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內,再放回冷凍。

2、如何解凍血清才不會使產品質量受損?

我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規則地搖晃均勻。

3、血清解凍后發現有絮狀沉淀物出現,該如何處理?

血清中沉淀物的出現有許多種原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但少量這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質量。

若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內,以400g 稍微離心,上清液即可接著加入培養基內一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

4、為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES 細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

5、有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或完全沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保血清的質量! 

6、為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現少量沉淀?


胎牛血清沒有預老化,儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應該不會影響血清的質量。推薦在-20℃儲存胎牛血清,避免反復凍融。

7、如何避免沉淀物的產生?

我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作:

解凍血清時請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產生沉淀物。解凍血清時請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發生。
發布者:撫州翊立颯生物科技開發有限公司
聯系電話:18322999038
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