利用紫外法測定鮭魚精DNA熔解溫度（Tm）
蟬鳴聲聲入夏來，烈日高照，暑氣炎炎，歡迎來到一年一度的人間大火爐時節——夏季。夏天，我們享受著天然免費的汗蒸和干蒸，不僅大腦熱到顫抖，連DNA都要化了，離變異也不遠了。
DNA 的變性的特點是爆發式的, 變性作用發生在一個很窄的范圍。通常把DNA 的雙螺旋結構失去一半時的溫度稱為該DNA 的熔點或熔解溫度( melting temperature ) , 用Tm 表示。DNA 的Tm 值一般在70～85 ℃之間。DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈，是在一個相當小的溫度范圍內完成的，一系列物化性質也發生改變: 260 nm 區紫外吸收值增高(增色效應) , 粘度降低, 浮力密度降低等。所以，我們可以利用紫外可見分光光度計檢測DNA樣品在260nm處吸光度隨溫度的變化，對解鏈過程進行監測。
在以下示例實驗中，使用梅特勒-托利多紫外可見分光光度計UV7配備酷T（CuveT）恒溫器，測定20℃-95℃升溫范圍內鮭魚精DNA在260nm處的吸光度變化，以監測其變性過程。我們用各溫度點測得的吸光度繪制圖譜，可得到一條溫度-吸光度S形曲線，如下圖所示：
DNA 的變性的特點是爆發式的, 變性作用發生在一個很窄的范圍。通常把DNA 的雙螺旋結構失去一半時的溫度稱為該DNA 的熔點或熔解溫度( melting temperature ) , 用Tm 表示。DNA 的Tm 值一般在70～85 ℃之間。DNA的變性從開始解鏈到完全解鏈，是在一個相當小的溫度范圍內完成的，一系列物化性質也發生改變: 260 nm 區紫外吸收值增高(增色效應) , 粘度降低, 浮力密度降低等。所以，我們可以利用紫外可見分光光度計檢測DNA樣品在260nm處吸光度隨溫度的變化，對解鏈過程進行監測。
在以下示例實驗中，使用梅特勒-托利多紫外可見分光光度計UV7配備酷T（CuveT）恒溫器，測定20℃-95℃升溫范圍內鮭魚精DNA在260nm處的吸光度變化，以監測其變性過程。我們用各溫度點測得的吸光度繪制圖譜，可得到一條溫度-吸光度S形曲線，如下圖所示：
圖：260nm處鮭魚精DNA的熔解曲線（案例來源梅特勒公眾號）
在此實驗案例中，鮭魚精DNA的Tm值通過確定S形曲線的拐點來確定。經測定和計算，鮭魚精DNA的Tm值為64.4℃，說明其G≡C堿基對的濃度相對較低。確定熔解溫度的另外一種方法是用切線法對S形曲線的拐點進行圖形化評估。
我司已為廣大相信光的實驗奧特曼準備好了應用秘笈和成套裝備，輕松應對需要對樣品進行溫控的紫外實驗。梅特勒-托利多超越系列紫外可見分光光度計可搭載酷T帕爾貼控溫系統或勞達（LAUDA）等水浴恒溫系統，實現對樣品精準快速的溫度控制：
梅特勒-托利多紫外可見分光光度計+酷T帕爾貼控溫系統方案：
梅特勒-托利多紫外可見分光光度計+勞達（LAUDA）水浴溫控系統聯用方案：
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