GST融合蛋白同位素（[γ³²P]ATP）激酶標記試劑盒產(chǎn)品說明書（中文版）

主要用途

YIJI GST融合蛋白同位素（[γ³²P]ATP）激酶標記試劑是一種旨在使用同位素（[γ³²P]ATP）和cAMP依賴性蛋白激酶A（protein kinase K），標記純化的目標融合蛋白，成為敏感探針的權威而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種GST融合的重組蛋白。其應用于后續(xù)遠西方雜交（FAR WESTERN BLOT） 印跡實驗和印跡覆膜結合（BLOT OVERLAY BINDING）實驗等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作便捷，反應敏感，重復性好。

技術背景

谷胱甘肽-S-轉移酶（glutathione-S-transferase；GST）融合蛋白（fusion protein）的技術，廣泛應用于蛋白與蛋白之間相互作用的研究、抗體的制造和純化、以及生化分析。基于GST融合蛋白由GSTmoietry、蛋白酶切離部位和已知激酶磷酸化部位構成，使用同位素（[γ³²P]ATP）和cAMP依賴性蛋白激酶A（protein kinase K），標記純化的目標融合蛋白，作為敏感的探針，在遠西方雜交（FAR WESTERN BLOT） 印跡實驗或印跡覆膜結合（BLOT OVERLAY BINDING）實驗中，探測和分析結合蛋白或多肽結構域。GST融合蛋白同位素（[γ³²P]ATP）激酶標記是蛋白組學研究的常用工具。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI緩沖液（Reagent A）  毫升

YIJI標記液（Reagent B）       微升（用戶自備）

YIJI反應液（Reagent C）       微升

YIJI酶促液（Reagent D）  微升

產(chǎn)品說明書       1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；有效保證6月

用戶自備

[γ³²P]ATP 同位素：用于同位素標記

1.5毫升離心管：用于樣品反應操作和保存的容器

干式恒溫儀：用于標記孵育

液體閃爍計數(shù)器（liquid scintillation counter）：用于同位素活性測定

實驗步驟

• 準備好純化的GST融合蛋白
• 移取xx微升YIJI緩沖液（Reagent A）到1.5毫升離心管
• 加入2.5微升用戶自備的GST融合蛋白（總量為10微克）
• 加入xx微升YIJI標記液（Reagent B）（注意：同位素總量為10毫居里/毫升；5000居里/毫摩爾）
• 加入xx微升YIJI反應液（Reagent C）
• 加入xx微升YIJI酶促液（Reagent D）
• 槍頭上下抽吸混勻
• 放進30℃干式恒溫儀孵育30分鐘
• 放進-70℃保存或置于冰槽里備用
• 或使用5至10微升（10⁷CPM）標記蛋白繼續(xù)后續(xù)遠西方雜交（FAR WESTERN BLOT） 印跡實驗和印跡覆膜結合（BLOT OVERLAY BINDING）實驗等

注意事項

• 本產(chǎn)品為20次操作
• 本產(chǎn)品的標記效率可達60%以上
• 操作時，須戴手套
• 操作時，嚴格無菌
• 同位素操作須嚴格遵守規(guī)章制度
• 建議使用帶濾芯的槍頭進行操作
• 同位素[γ³²P]ATP（1居里=37GBq），建議使用ICN或AMERSHAM（安瑪西亞）公司
• 由于[γ³²P]同位素的半衰期短，建議使用新鮮同位素材料；且標記后即刻使用
• 可以直接在GST融合蛋白樹脂上進行標記，然后常規(guī)洗脫或凝血酶（THROMBIN）切離純化；純化后進行同位素活性測定
• 本公司提供系列同位素處理試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標準

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶