SH-SY5Y人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的培養(yǎng)、凍存復(fù)蘇和常見問題解答
【產(chǎn)品介紹】
SH-SY5Y是一種人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，是神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SK-N-SH的三次克隆(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)的亞系，最初于1970年從一位4歲女孩的骨髓中分離建立的，在形態(tài)、生理、生化功能上與人體細(xì)胞相似，可以轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，并表現(xiàn)出一系列具有高度指導(dǎo)意義的神經(jīng)生物學(xué)特性。廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)研究，包括神經(jīng)退行性疾病（如帕金森病和阿爾茨海默病）、神經(jīng)毒性、神經(jīng)分化、基因功能研究以及信號傳導(dǎo)途徑研究等領(lǐng)域。它們可以經(jīng)過特定的分化方案處理，分化為更接近于成熟神經(jīng)元的細(xì)胞類型。是神經(jīng)科學(xué)研究領(lǐng)域中的一個重要工具，它為科學(xué)家們提供了一個模擬人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)元在體外條件下行為的模型。據(jù)報道，它們表現(xiàn)出中等水平的多巴胺β羥化酶活性。
SY5Y的生長特點(diǎn)為大部分貼壁，呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團(tuán)，少部分懸浮，圓潤有光澤。以下是中喬新舟拍攝的不同倍數(shù)的SH-SY5Y細(xì)胞圖：
4X
10X
20X
細(xì)胞名稱： SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)
細(xì)胞別稱： SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y
細(xì)胞貨號： ZQ0050
生長特性： 混合、貼壁和懸浮（該細(xì)胞培養(yǎng)時貼壁細(xì)胞與懸浮細(xì)胞同時存在，均為正常形態(tài)的活細(xì)胞）。
培養(yǎng)條件： 43.5% MEM（含NEAA）（中喬新舟貨號：ZQ-300）+43.5% F12（中喬新舟貨號：ZQ-400） +10% FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1% 雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）+1% Sodium Pyruvate（中喬新舟貨號：CSP003）+1% L-alanyl-L-glutamine（中喬新舟貨號：CSP004）+1% NEAA (中喬新舟貨號：CSP008)；
或者：DMEM (中喬新舟貨號：ZQ-100)+10%FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）；
完全培養(yǎng)基貨號：ZM0050 或ZM0050-B；
培養(yǎng)環(huán)境：95%空氣，5%CO2；37℃
【傳代培養(yǎng)】
該細(xì)胞為半貼壁半懸浮細(xì)胞，懸浮細(xì)胞是活細(xì)胞，可用離心管收集細(xì)胞懸液后，于（125g，3 ～5分鐘）1000-1200rmp 收集細(xì)胞；部分貼壁不牢的細(xì)胞可直接吹起使之懸浮；貼壁較牢固的細(xì)胞可用PBS 潤洗后，在培養(yǎng)瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含EDTA）置于 37℃培養(yǎng)箱中消化，待細(xì)胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后可用 4-6 mL 左右完全培養(yǎng)基進(jìn)行終止消化，輕輕吹散細(xì)胞后離心收集細(xì)胞；將懸浮的細(xì)胞和貼壁的細(xì)胞收集到一起混勻后按比例接種到新的培養(yǎng)瓶。
該細(xì)胞增殖比較緩慢，容易聚團(tuán)生長，鏡下觀察融合率不高，但細(xì)胞簇實(shí)際密度大，需要5-7天才能達(dá)到80%以上的融合率。
【細(xì)胞凍存】
1.細(xì)胞密度80%以上，活細(xì)胞百分率達(dá) 95%以上時，將細(xì)胞按照以上步驟進(jìn)行消化收集細(xì)胞沉淀進(jìn)行凍存。
2.細(xì)胞沉淀用適量 4 °C 凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶 T25 細(xì)胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細(xì)胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉(zhuǎn)至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃ , 放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后轉(zhuǎn)移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
【細(xì)胞復(fù)蘇】
1.液氮取出的細(xì)胞放入干冰中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞房，提前準(zhǔn)備好完全培養(yǎng)基，離心管。
2.凍管細(xì)胞在 37 °C 水浴中迅速解凍（大約 1-2 分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含 3-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3 ～5 分鐘）1000-1200rmp去除培養(yǎng)基， 細(xì)胞沉淀用手指彈松，添加3ml完全培養(yǎng)基混勻細(xì)胞并進(jìn)行計數(shù)，用適量完全培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至 0.6-2.0X105 ，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。建議 T25 培養(yǎng)瓶添加 5-7ml 完全培養(yǎng)基。當(dāng)密度達(dá)到 80%以上時傳代。
【常見問題】
細(xì)胞狀態(tài)差如何調(diào)整？
培養(yǎng)基和血清：確保使用正確的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和加入適量血清，血清濃度可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)適當(dāng)調(diào)整。避免使用過期或長時間存放的培養(yǎng)基，新鮮配制的完全培養(yǎng)基建議在兩周內(nèi)使用完畢。
細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境：確認(rèn)培養(yǎng)溫度、濕度、氣相條件是否正常。
細(xì)胞傳代操作：細(xì)胞傳代時，注意消化時間和胰酶濃度，避免因消化時間過長或過短導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。
細(xì)胞結(jié)團(tuán)如何調(diào)整？
調(diào)整細(xì)胞密度
控制接種密度：控制接種密度不要過高，以減少細(xì)胞聚集成團(tuán)的機(jī)會。一般建議細(xì)胞密度達(dá)到80%左右進(jìn)行傳代。
低密度傳代：可以嘗試低密度傳代，即減少每次傳代的細(xì)胞數(shù)量，這有助于細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中更均勻地分布。
優(yōu)化培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基選擇：確保使用正確的SH-SY5Y細(xì)胞生長的培養(yǎng)基，并根據(jù)需要調(diào)整培養(yǎng)基的成分，如血清濃度等；
確保培養(yǎng)環(huán)境適宜，如穩(wěn)定的溫度、濕度和CO₂濃度等。
注意消化操作
延長消化時間：如果細(xì)胞結(jié)團(tuán)是由于消化不充分引起的，可以適當(dāng)延長消化時間，但要避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
輕柔吹打：在消化過程中和傳代時，用移液槍或吸管輕柔地吹打細(xì)胞懸液，以分散細(xì)胞團(tuán)塊。注意吹打力度要適中，避免產(chǎn)生氣泡。
預(yù)防成團(tuán)的方法：
1、控制細(xì)胞密度不超過80%，當(dāng)密度到達(dá)或超過80%及時傳代；傳代時切勿暴力吹打，避免對細(xì)胞造成機(jī)械刺激。
2、使用質(zhì)量好的細(xì)胞培養(yǎng)基和胎牛血清，減少內(nèi)毒素等有害物質(zhì)對細(xì)胞的刺激。
3、請勿頻繁把細(xì)胞從培養(yǎng)箱拿出，氣溫低時需開暖氣維持細(xì)胞房溫度；使用PBS、培養(yǎng)基前37 °C預(yù)熱，以避免溫差對細(xì)胞造成刺激。
【注意事項(xiàng)】
1、SH-SY5Y細(xì)胞以懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的混合形態(tài)生長。貼壁細(xì)胞生長成具有多個短而細(xì)的細(xì)胞突起(神經(jīng)突)的神經(jīng)母細(xì)胞簇。細(xì)胞在生長過程中會聚集，形成團(tuán)塊可能會粘附底部或漂浮。這些細(xì)胞均為活細(xì)胞。如果在培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)絕大部分細(xì)胞呈現(xiàn)貼壁狀態(tài)，很少有懸浮的活細(xì)胞，這是正常情況。我們建議用戶按照貼壁細(xì)胞的方式進(jìn)行消化和培養(yǎng)。
2、如果細(xì)胞培養(yǎng)生長過程呈現(xiàn)為混合形態(tài)，細(xì)胞傳代時先將懸浮細(xì)胞離心收集。然后將貼壁細(xì)胞及聚團(tuán)細(xì)胞用新鮮胰酶溶液沖洗一遍， 再加入1-2ml胰酶溶液，消化約5分鐘左右使得細(xì)胞分離變圓后加入新鮮的培養(yǎng)基后離心收集重懸，同時合并收集的懸浮細(xì)胞懸液，傳至新的培養(yǎng)瓶中。如果培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)懸浮的細(xì)胞數(shù)量比較多，或者細(xì)胞雖然為貼壁狀態(tài)但容易聚團(tuán)且生長緩慢，則需要在換液和傳代時通過離心收集這些懸浮細(xì)胞，并且盡快更換高質(zhì)量的血清以促進(jìn)細(xì)胞貼壁和生長。
3、細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感，建議您使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清進(jìn)行培養(yǎng)或選擇訂購中喬新舟含配套SH-SY5Y細(xì)胞完全培養(yǎng)液。
4、容易聚團(tuán)，消化后靜置10min去除大塊沉淀收集上清離心重鋪。
5、細(xì)胞傳代時比例不宜太高，培養(yǎng)密度不宜太低，一般1:2或1:3傳代較為合適，培養(yǎng)密度越低增殖速度越慢； 細(xì)胞生長過多時會堆在一起并逐漸脫落，需要在脫落前及時傳代；一些細(xì)胞團(tuán)在傳代時需要吹散，吹打力度需適中； 細(xì)胞密度越高，培養(yǎng)基消耗越快，注意及時換液或傳代。
SH-SY5Y是一種人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，是神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系SK-N-SH的三次克隆(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)的亞系，最初于1970年從一位4歲女孩的骨髓中分離建立的，在形態(tài)、生理、生化功能上與人體細(xì)胞相似，可以轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元樣細(xì)胞，并表現(xiàn)出一系列具有高度指導(dǎo)意義的神經(jīng)生物學(xué)特性。廣泛應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)研究，包括神經(jīng)退行性疾病（如帕金森病和阿爾茨海默病）、神經(jīng)毒性、神經(jīng)分化、基因功能研究以及信號傳導(dǎo)途徑研究等領(lǐng)域。它們可以經(jīng)過特定的分化方案處理，分化為更接近于成熟神經(jīng)元的細(xì)胞類型。是神經(jīng)科學(xué)研究領(lǐng)域中的一個重要工具，它為科學(xué)家們提供了一個模擬人類神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)元在體外條件下行為的模型。據(jù)報道，它們表現(xiàn)出中等水平的多巴胺β羥化酶活性。
SY5Y的生長特點(diǎn)為大部分貼壁，呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團(tuán)，少部分懸浮，圓潤有光澤。以下是中喬新舟拍攝的不同倍數(shù)的SH-SY5Y細(xì)胞圖：
4X
10X
20X
細(xì)胞名稱： SH-SY5Y(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)
細(xì)胞別稱： SHSY5Y; SHSY-5Y; SH-Sy5y; SK-SH-SY5Y; SY5Y
細(xì)胞貨號： ZQ0050
生長特性： 混合、貼壁和懸浮（該細(xì)胞培養(yǎng)時貼壁細(xì)胞與懸浮細(xì)胞同時存在，均為正常形態(tài)的活細(xì)胞）。
培養(yǎng)條件： 43.5% MEM（含NEAA）（中喬新舟貨號：ZQ-300）+43.5% F12（中喬新舟貨號：ZQ-400） +10% FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1% 雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）+1% Sodium Pyruvate（中喬新舟貨號：CSP003）+1% L-alanyl-L-glutamine（中喬新舟貨號：CSP004）+1% NEAA (中喬新舟貨號：CSP008)；
或者：DMEM (中喬新舟貨號：ZQ-100)+10%FBS（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）；
完全培養(yǎng)基貨號：ZM0050 或ZM0050-B；
培養(yǎng)環(huán)境：95%空氣，5%CO2；37℃
【傳代培養(yǎng)】
該細(xì)胞為半貼壁半懸浮細(xì)胞，懸浮細(xì)胞是活細(xì)胞，可用離心管收集細(xì)胞懸液后，于（125g，3 ～5分鐘）1000-1200rmp 收集細(xì)胞；部分貼壁不牢的細(xì)胞可直接吹起使之懸浮；貼壁較牢固的細(xì)胞可用PBS 潤洗后，在培養(yǎng)瓶中加入 1-2 毫升 0.25% 胰蛋白酶溶液（含EDTA）置于 37℃培養(yǎng)箱中消化，待細(xì)胞變圓收縮成流沙狀態(tài)脫落后可用 4-6 mL 左右完全培養(yǎng)基進(jìn)行終止消化，輕輕吹散細(xì)胞后離心收集細(xì)胞；將懸浮的細(xì)胞和貼壁的細(xì)胞收集到一起混勻后按比例接種到新的培養(yǎng)瓶。
該細(xì)胞增殖比較緩慢，容易聚團(tuán)生長，鏡下觀察融合率不高，但細(xì)胞簇實(shí)際密度大，需要5-7天才能達(dá)到80%以上的融合率。
【細(xì)胞凍存】
1.細(xì)胞密度80%以上，活細(xì)胞百分率達(dá) 95%以上時，將細(xì)胞按照以上步驟進(jìn)行消化收集細(xì)胞沉淀進(jìn)行凍存。
2.細(xì)胞沉淀用適量 4 °C 凍存液（貨號：CSP042）重懸， 建議一瓶 T25 細(xì)胞凍存一管（1ml/管），直接將分裝好的細(xì)胞凍存管置于-80℃超低溫冰箱中過夜，若需液氮長期保存，需先置于-80℃至少一天后方可轉(zhuǎn)至液氮罐中。
NOTE:若不是我司凍存液請按照凍存液說明書操作，若是自配凍存液需梯度降溫凍存(2-8℃ , 放置 40min:-20℃,放置 30min-60min， -80℃放置一天后轉(zhuǎn)移至液氮保存)或使用程序降溫盒降溫后，再轉(zhuǎn)移至液氮中保存。
【細(xì)胞復(fù)蘇】
1.液氮取出的細(xì)胞放入干冰中轉(zhuǎn)移到細(xì)胞房，提前準(zhǔn)備好完全培養(yǎng)基，離心管。
2.凍管細(xì)胞在 37 °C 水浴中迅速解凍（大約 1-2 分鐘）。為了減少污染的可能性，保持凍管瓶蓋在水浴液面之上。 一旦大部分內(nèi)容物解凍，立即將凍管移出水浴，70%的乙醇消毒凍管外壁。
3.將內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到含 3-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中，輕輕混勻，離心（125 g，3 ～5 分鐘）1000-1200rmp去除培養(yǎng)基， 細(xì)胞沉淀用手指彈松，添加3ml完全培養(yǎng)基混勻細(xì)胞并進(jìn)行計數(shù)，用適量完全培養(yǎng)基將細(xì)胞密度調(diào)整至 0.6-2.0X105 ，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，于培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。建議 T25 培養(yǎng)瓶添加 5-7ml 完全培養(yǎng)基。當(dāng)密度達(dá)到 80%以上時傳代。
【常見問題】
細(xì)胞狀態(tài)差如何調(diào)整？
培養(yǎng)基和血清：確保使用正確的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和加入適量血清，血清濃度可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)適當(dāng)調(diào)整。避免使用過期或長時間存放的培養(yǎng)基，新鮮配制的完全培養(yǎng)基建議在兩周內(nèi)使用完畢。
細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境：確認(rèn)培養(yǎng)溫度、濕度、氣相條件是否正常。
細(xì)胞傳代操作：細(xì)胞傳代時，注意消化時間和胰酶濃度，避免因消化時間過長或過短導(dǎo)致的細(xì)胞損傷。
細(xì)胞結(jié)團(tuán)如何調(diào)整？
調(diào)整細(xì)胞密度
控制接種密度：控制接種密度不要過高，以減少細(xì)胞聚集成團(tuán)的機(jī)會。一般建議細(xì)胞密度達(dá)到80%左右進(jìn)行傳代。
低密度傳代：可以嘗試低密度傳代，即減少每次傳代的細(xì)胞數(shù)量，這有助于細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中更均勻地分布。
優(yōu)化培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基選擇：確保使用正確的SH-SY5Y細(xì)胞生長的培養(yǎng)基，并根據(jù)需要調(diào)整培養(yǎng)基的成分，如血清濃度等；
確保培養(yǎng)環(huán)境適宜，如穩(wěn)定的溫度、濕度和CO₂濃度等。
注意消化操作
延長消化時間：如果細(xì)胞結(jié)團(tuán)是由于消化不充分引起的，可以適當(dāng)延長消化時間，但要避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
輕柔吹打：在消化過程中和傳代時，用移液槍或吸管輕柔地吹打細(xì)胞懸液，以分散細(xì)胞團(tuán)塊。注意吹打力度要適中，避免產(chǎn)生氣泡。
預(yù)防成團(tuán)的方法：
1、控制細(xì)胞密度不超過80%，當(dāng)密度到達(dá)或超過80%及時傳代；傳代時切勿暴力吹打，避免對細(xì)胞造成機(jī)械刺激。
2、使用質(zhì)量好的細(xì)胞培養(yǎng)基和胎牛血清，減少內(nèi)毒素等有害物質(zhì)對細(xì)胞的刺激。
3、請勿頻繁把細(xì)胞從培養(yǎng)箱拿出，氣溫低時需開暖氣維持細(xì)胞房溫度；使用PBS、培養(yǎng)基前37 °C預(yù)熱，以避免溫差對細(xì)胞造成刺激。
【注意事項(xiàng)】
1、SH-SY5Y細(xì)胞以懸浮細(xì)胞和貼壁細(xì)胞的混合形態(tài)生長。貼壁細(xì)胞生長成具有多個短而細(xì)的細(xì)胞突起(神經(jīng)突)的神經(jīng)母細(xì)胞簇。細(xì)胞在生長過程中會聚集，形成團(tuán)塊可能會粘附底部或漂浮。這些細(xì)胞均為活細(xì)胞。如果在培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)絕大部分細(xì)胞呈現(xiàn)貼壁狀態(tài)，很少有懸浮的活細(xì)胞，這是正常情況。我們建議用戶按照貼壁細(xì)胞的方式進(jìn)行消化和培養(yǎng)。
2、如果細(xì)胞培養(yǎng)生長過程呈現(xiàn)為混合形態(tài)，細(xì)胞傳代時先將懸浮細(xì)胞離心收集。然后將貼壁細(xì)胞及聚團(tuán)細(xì)胞用新鮮胰酶溶液沖洗一遍， 再加入1-2ml胰酶溶液，消化約5分鐘左右使得細(xì)胞分離變圓后加入新鮮的培養(yǎng)基后離心收集重懸，同時合并收集的懸浮細(xì)胞懸液，傳至新的培養(yǎng)瓶中。如果培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)懸浮的細(xì)胞數(shù)量比較多，或者細(xì)胞雖然為貼壁狀態(tài)但容易聚團(tuán)且生長緩慢，則需要在換液和傳代時通過離心收集這些懸浮細(xì)胞，并且盡快更換高質(zhì)量的血清以促進(jìn)細(xì)胞貼壁和生長。
3、細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感，建議您使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清進(jìn)行培養(yǎng)或選擇訂購中喬新舟含配套SH-SY5Y細(xì)胞完全培養(yǎng)液。
4、容易聚團(tuán)，消化后靜置10min去除大塊沉淀收集上清離心重鋪。
5、細(xì)胞傳代時比例不宜太高，培養(yǎng)密度不宜太低，一般1:2或1:3傳代較為合適，培養(yǎng)密度越低增殖速度越慢； 細(xì)胞生長過多時會堆在一起并逐漸脫落，需要在脫落前及時傳代；一些細(xì)胞團(tuán)在傳代時需要吹散，吹打力度需適中； 細(xì)胞密度越高，培養(yǎng)基消耗越快，注意及時換液或傳代。
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