PRRSV 分為美洲型（如 VR-2332、JXA1、HuN4 等）和歐洲型（如 LV、NADC30 等），單克隆抗體（mAb）的研發(fā)通常針對不同毒株的特異性抗原，常見毒株型號及對應(yīng)靶點如下：

• 經(jīng)典毒株：如 VR-2332（美洲型原型株）、LV（歐洲型原型株），用于制備廣譜識別毒株的 mAb。
• 變異毒株：如 JXA1、HuN4（高致病性 PRRSV，中國流行株）、NADC30-like（北美變異株），mAb 可針對其獨特的抗原表位。
• 抗原靶點： 
  • GP5 蛋白：囊膜糖蛋白，是 PRRSV 最主要的抗原蛋白，mAb 可識別其線性或構(gòu)象表位，用于病毒中和及檢測。
  • N 蛋白：核衣殼蛋白，保守性高，mAb 常用于 ELISA、WB 等檢測方法，特異性識別病毒核酸結(jié)合蛋白。

• 亞型：以小鼠來源 mAb 為例，常見亞型為 IgG1、IgG2a、IgG2b，少數(shù)為 IgM（如針對 N 蛋白的 mAb 可能以 IgG1 為主）。
• 純度：通過親和層析（Protein A/G）或離子交換層析純化后，純度可達 95% 以上，適用于高靈敏度檢測。

• 效價： 
  • 細胞培養(yǎng)上清液效價：通常為 1:256～1:1024（ELISA 法測定）。
  • 小鼠腹水效價：可達 1:10⁵～1:10⁶，甚至更高（如針對 GP5 的中和性 mAb 腹水效價可＞1:2×10⁶）。
• 特異性： 
  • 與 PRRSV 其他亞型（如美洲型與歐洲型）可能存在交叉反應(yīng)，但高特異性 mAb 可區(qū)分不同毒株（如僅識別美洲型 GP5 的 mAb 與歐洲型無交叉反應(yīng)）。
  • 與其他豬病病毒（如豬瘟病毒、偽狂犬病毒、圓環(huán)病毒等）無交叉反應(yīng)，可通過交叉反應(yīng)實驗驗證（如 ELISA、IFA）。

1. 抗原制備： 
   • 純化 PRRSV 全病毒（滅活或亞單位抗原，如 GP5 重組蛋白），或合成 GP5、N 蛋白的特異性抗原表位肽段。
2. 動物免疫： 
   • 免疫 BALB/c 小鼠（4～6 周齡），通過皮下 / 腹腔注射抗原，間隔 2～3 周加強免疫，共 3～4 次，最后一次免疫后 3～5 天取脾細胞。
3. 細胞融合與篩選： 
   • 脾細胞與骨髓瘤細胞（如 SP2/0）按 5:1 比例融合，加入 HAT 培養(yǎng)基篩選雜交瘤細胞。
   • 通過間接 ELISA、免疫熒光（IFA）或病毒中和試驗（VN）篩選陽性克隆，重點篩選針對 GP5 高親和力或中和活性的 mAb。
4. 克隆化與生產(chǎn)： 
   • 采用有限稀釋法克隆化雜交瘤細胞，直至單克隆穩(wěn)定性達標。
   • 通過小鼠腹腔注射（制備腹水）或無血清培養(yǎng)（細胞培養(yǎng)上清）生產(chǎn) mAb，純化后凍干或液體保存。

• 抗原針對性：以 PRRSV 特異性蛋白（如 GP5）為抗原，避免與其他病毒蛋白交叉。
• 多輪篩選：通過 IFA 檢測 mAb 與 PRRSV 感染細胞的結(jié)合，排除與正常細胞的非特異性反應(yīng)；通過交叉反應(yīng)實驗（如與豬瘟病毒、偽狂犬病毒等共孵育）驗證特異性。
• 中和活性驗證：針對 GP5 的 mAb 需驗證其病毒中和能力（如 VN 試驗），確保靶向病毒入侵關(guān)鍵表位。

1. 病毒檢測與診斷：

   • ELISA 試劑盒：以抗 N 蛋白 mAb 為捕獲抗體，抗 GP5 mAb 為檢測抗體，用于血清、組織液中 PRRSV 抗原的定量檢測。
   • 免疫熒光（IFA）：標記熒光素的 mAb 用于檢測細胞或組織中的病毒抗原，輔助病理診斷。
   • 膠體金試紙條：基于 mAb 的免疫層析技術(shù)，快速檢測豬鼻腔分泌物、精液中的 PRRSV。

2. 病毒中和與治療研究：

   • 高中和活性的抗 GP5 mAb 可用于體外抗病毒實驗，或作為被動免疫制劑的候選（如豬群緊急接種）。

3. 病毒學(xué)基礎(chǔ)研究：

   • 用于 PRRSV 復(fù)制機制研究（如 mAb 阻斷 GP5 與宿主細胞受體結(jié)合）、抗原表位分析（如突變株競爭結(jié)合實驗）。

• 美國 ABclonal 公司：抗 PRRSV N 蛋白 mAb（克隆號 PRRS-10），亞型 IgG1，適用于 ELISA、WB、IFA，特異性識別美洲型毒株。
• 中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所研發(fā)產(chǎn)品：抗 PRRSV GP5 蛋白 mAb（如 4B7 株），可中和高致病性 JXA1 株，用于疫苗效力評價。

• 毒株特異性：不同 mAb 對 PRRSV 亞型的識別能力不同，需根據(jù)目標毒株（如美洲型 / 歐洲型、經(jīng)典株 / 變異株）選擇合適的 mAb。
• 應(yīng)用場景適配：中和性 mAb 適用于抗病毒研究，而抗 N 蛋白 mAb 更適合檢測病毒核酸結(jié)合蛋白（如病毒載量分析）。
• 保存條件：純化 mAb 需在 - 20℃或 - 80℃凍存，避免反復(fù)凍融，液體形式可加入 0.05% 疊氮鈉防腐。