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端粒酶活性檢直接檢測法和間接檢測法的優缺點對比

瀏覽次數:195 發布日期:2025-6-17  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
端粒酶活性和催化亞基hTERT基因表達量作為重要的腫瘤標志物,與90%惡性腫瘤呈正相關,可應用于干細胞成瘤性快檢。中檢院在進行干細胞制品質量復核時,也是進行端粒酶活性檢查,采用端粒酶活性(TRAP法)和hTERT基因表達量的方法,這兩種方法的檢測結果是一致的。   
1. 直接檢測法(如TRAP法及其衍生技術)
優點:
直接檢測端粒酶活性:通過延伸端粒重復序列(TTAGGG)來反映端粒酶的生物學功能,是端粒酶活性檢測的“金標準”。
廣泛應用:TRAP法是經典方法,經過多年優化(如RQ-TRAP、TRAP-ELISA等),在科研和臨床中有較多文獻支持。
缺點:
操作復雜:需抽提蛋白、端粒酶延伸反應、PCR擴增(QPCR/電泳/雜交)等多步驟,耗時耗力,技術難度高。
穩定性差:樣本處理(如蛋白提。┮讓е露肆C甘Щ睿绊懡Y果可靠性。
靈敏度與特異性不足:SYBR Green法引物特異性較差,易產生非特異性擴增;ELISA法重復性不佳,易受干擾;低豐度樣本(如少量腫瘤細胞)檢測受限。
2. 間接檢測法(如hTERT基因表達檢測,Biowing試劑盒為代表)
優點:
操作簡便:無需蛋白提取和延伸反應,直接檢測hTERT mRNA表達,步驟少、耗時短。
高靈敏度與穩定性:雙色熒光TaqMan探針法特異性強,優于SYBR Green;兩套檢測系統信號放大,靈敏度更高(尤其對低表達樣本);結果重復性好,受樣本處理影響小。
配套完善:提供陽性和陰性對照標準品,支持定性和定量分析。
技術成熟:適用于高通量篩查。
缺點:
間接反映活性:依賴PCR技術,需嚴格防止RNA降解。
總結對比
 
 
 
 
發布者:上海翼和應用生物技術有限公司
聯系電話:021-33559491
E-mail:jiyn@biowing.com.cn

標簽: 端粒酶
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