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單細(xì)胞懸液制備全流程介紹及相關(guān)注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù):466 發(fā)布日期:2025-5-14  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

流式細(xì)胞術(shù)做為一種快速的細(xì)胞定量分析技術(shù),能夠同時(shí)對(duì)單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行多種特征參數(shù)的檢測(cè),如細(xì)胞大小、DNA含量、蛋白質(zhì)表達(dá)等,現(xiàn)已成為科研領(lǐng)域中不可或缺的重要工具。

流式檢測(cè)能順利進(jìn)行的硬要求之一是,樣本必須能在鞘液中流動(dòng),因此,無(wú)論是培養(yǎng)的細(xì)胞,還是從各種組織中提取出來(lái)的細(xì)胞,都需要把待測(cè)樣本制備成單細(xì)胞懸液!制備欠妥的樣本,不僅會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和結(jié)果的可靠性,一些大的細(xì)胞團(tuán)塊甚至?xí)氯毫飨到y(tǒng)而影響儀器的正常運(yùn)行。


實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1、取脾臟
頸椎脫臼法處死小鼠;在解剖臺(tái)上固定小鼠,從底端小心剪開小鼠整個(gè)腹部皮膚,暴露出小鼠腹膜;剪開小鼠腹膜,暴露出脾臟,摘取,并充分去除上面的脂肪組織;將取下的脾臟剪碎,置于預(yù)冷的PBS中浸泡待用

2、制備單細(xì)胞
使用凈信單細(xì)胞懸液制備儀,設(shè)置參數(shù),點(diǎn)擊啟動(dòng),程序結(jié)束后加入終止液

3、裂解紅細(xì)胞
在離心后的細(xì)胞懸液中加入ACK紅細(xì)胞裂解液,重懸細(xì)胞,在室溫裂解5min

4、過(guò)濾洗滌
通過(guò)過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾,將過(guò)濾后的細(xì)胞懸液收集至離心管中,離心5min,去除上清液

5、單細(xì)胞計(jì)數(shù)
顯微鏡觀察細(xì)胞,使用染色緩沖液重懸細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度,吸取細(xì)胞懸液至流式管中,準(zhǔn)備染色

結(jié)果分析:
 

小鼠脾臟活率99%,方便后續(xù)進(jìn)行流式分析。

注意事項(xiàng):

1.組織盡量剪碎,消化效果更好
2.摘取脾臟后,盡可能移除黏連的脂肪組織,提高脾臟細(xì)胞的占比
3.建議使用新鮮配制的紅細(xì)胞裂解液
4.消化后的細(xì)胞應(yīng)洗滌干凈,否則影響流式效果

單細(xì)胞懸液制備儀不僅效率高、溫和,保護(hù)細(xì)胞活性,還精準(zhǔn)可控,適應(yīng)不同組織類型。高通量設(shè)計(jì),提升實(shí)驗(yàn)效率,對(duì)于需要處理多個(gè)樣本的研究項(xiàng)目,單細(xì)胞懸液制備儀的高通量設(shè)計(jì)可以同時(shí)處理多個(gè)樣本,大幅縮短實(shí)驗(yàn)時(shí)間。選擇合適的儀器,可批量制備單細(xì)胞懸液,節(jié)約了實(shí)驗(yàn)時(shí)間,根據(jù)需求選擇儀器中人體、小鼠各個(gè)組織、器官對(duì)應(yīng)程序,提高了單細(xì)胞懸液制備的活率和得率,使后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行更加順利。

發(fā)布者:上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司
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