RAW264.7細胞避免分化的方法及培養的注意事項總結

瀏覽次數：722　發布日期：2025-3-18　來源：本站　僅供參考，謝絕轉載，否則責任自負

RAW264.7細胞作為一種經典的小鼠巨噬細胞系，因其易于培養和操作而成為科研工作者的得力助手。然而，RAW264.7細胞在培養過程中容易發生分化，導致細胞形態改變、功能下降，甚至影響實驗結果的可靠性。如何讓RAW264.7細胞“長得更漂亮”，保持其原始的形態和功能？今天，我們將為您揭秘RAW264.7細胞培養的黃金法則，助您輕松駕馭這一細胞系！

細胞信息

l 倍增時間：11-30 hours，（生長快速，消耗營養快速，T25瓶建議添加7ml完全培養基，次日進行觀察生長速度）。
l 傳代比例：1:4-6
l 培養體系：DMEM高糖（品牌：中喬新舟貨號：ZQ-100）+10%胎牛血清（中喬新舟貨號：ZQ0500）+1%雙抗（中喬新舟貨號：CSP006）
l 細胞形態：該株巨噬細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形的細胞。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆在一起，有些細胞甚至脫落漂浮，這些漂浮的細胞是活的，在傳代時應收集起來離心，細胞沉淀可以繼續培養。
l 換液頻率：2~3次/周

正確傳代方法一

正確的傳代方法是 RAW 264.7 細胞培養的關鍵，每一步操作都要細致入微，稍有不慎細胞就分化了。RAW 264.7 細胞不能用胰酶消化，胰酶消化傳代反而更容易分化。我司培養 RAW 264.7 細胞是十余年，摸索出一個刮刀傳代的方法，此方法操作簡單，能更好地控制細胞分化率。為了更加直觀學習傳代步驟，我們用視頻進行講解，方便大家更好把控傳代步驟：

正確傳代方法二

當您沒有準備刮刀時，我司建議您按照以下操作步驟進行傳代，減少細胞的分化。
l 細胞密度達到80%。用手掌心拍打瓶尾部，觀察細胞脫落情況。
l 拍打過程中有50-80%的細胞會脫落。此時收集脫落細胞。
l 按照1：4-6的比例傳代，并補充新鮮完全培養基。T25瓶7ml完全培養基。
l （切記用槍頭吹打或巴氏吸管吹打，由于每個人吹打力度不同，吹打次數不同，傳代3-5次后會造成很多不可控因素導致細胞分化）。

l 以下是我司客戶拍打傳代圖：

（客戶按照1：4-6比例傳代，第二天提供20X細胞狀態圖。

T25培養瓶活細胞RAW264.7到貨培養須知：

l 放入培養箱靜止2-4h后觀察細胞貼壁情況，并進行拍照。
l 若少量漂浮細胞，需要離心1200轉5分鐘收集細胞，貼壁細胞根據視頻步驟進行傳代處理，無刮刀根據“方法二”進行處理。
l 若對傳代密度把控不了和操作步驟還是不了解，可當天聯系我司銷售人員/區域代理或者我司技術人員。

培養注意事項

l 該細胞傳代時不需要用胰酶消化。傳代時，用無菌細胞刮刮拭培養表面將細胞刮落，收集離心后重懸接種到新的培養瓶中。
l 該細胞形態上包含松散貼壁的紡錘形和圓形或者立方形。當細胞密度較大時，細胞會輕微脫落變圓或者許多細胞堆積在一起，有些細胞甚至脫落漂浮。這些漂浮的細胞是存活的，在傳代時應收集起來，離心后細胞沉淀可以繼續培養。細胞生長密度越大時，巨噬細胞（圓細胞）就會越多。
l 細胞對血清質量非常敏感，可能引起細胞貼壁能力變化或者細胞分化，應選用高質量的胎牛血清。
l 培養條件、運輸、環境變化等因素會影響此細胞的狀態，因此收到細胞后需要調整一段時間，請耐心培養。
l 強烈推薦使用本公司對應的培養基，減少細胞培養過程的變因。

一、 RAW264.7凍存管復蘇步驟：

l 從液氮中取出凍存的raw26.4細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉移到實驗室)
l 將細胞懸液轉移至含預溫培養基的離心管中，輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
l 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養基重懸細胞。（T25添加7ml）
l 將細胞接種于培養皿中，置于37℃、5% CO₂的培養箱中培養。
l 以下圖片是我司客戶收到凍存管復蘇24h后狀態圖。