① 小鼠乳腺癌細胞（4T1）為貼壁細胞，上皮細胞樣，細胞在低密度時及傳代第二天會有少量細胞為圓形或沒有上皮細胞形態的細胞，期間不要換液，一般傳代48h后會恢復正常。

① 4T1細胞密度越高消化時間越長，建議細胞密度80%進行傳代，消化時間約5-10min。（不同品牌、不同溫度的胰酶可能消化時間有區別）

a. 去除細胞上清，使用0.25%胰酶替代PBS清洗一遍；

b. 加入適量胰酶，放入37℃培養箱消化，5min左右取出觀察一次；

c. 如觀察到有大部分細胞變圓，可輕拍瓶身，如細胞不可脫落則延長消化時間。

d. 如觀察到有部分細胞脫落，則將已經脫落的細胞懸液收集到離心管中加入完全培養基中止消化，原瓶中再次加入新鮮胰酶重復消化一次。

e. 將分次消化的細胞懸液集中在一起進行離心，去除上清后按照1：6-1：8的比例進行分瓶。

③ 血清質量差異可能引起倍增時間波動，建議選用高質量的胎牛血清。推薦使用4T1細胞專用培養基（TCM-G705）。