血清沉淀相關(guān)介紹
在細(xì)胞培養(yǎng)中，血清的品質(zhì)在一定程度上可以影響到細(xì)胞培養(yǎng)的成敗，如果血清中出現(xiàn)沉淀，不免會讓人擔(dān)心細(xì)胞會不會因為沉淀而出現(xiàn)問題。所以，關(guān)于血清沉淀，小編和大家分享以下幾點內(nèi)容。
一、血清沉淀物到底是什么？
常見的血清沉淀有以下幾種：
纖維蛋白：纖維蛋白是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1~2mm，可以用肉眼觀察到。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾和罐裝處理都是在低溫條件下快速完成的，血清中的纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)，但在解凍后，血清中的纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。
磷酸鈣：常見的一種沉淀物，會造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加，這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此通常會被誤認(rèn)為是微生物污染。
其他：膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)也是血清中出現(xiàn)沉淀的常見原因。
二、血清沉淀物對細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？
血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，經(jīng)過我們的試驗以及細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗表明，血清沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)。
三、血清沉淀物是不是污染？
血清沉淀物中，磷酸鈣往往會被誤認(rèn)為是微生物污染，特別是在37℃條件下培養(yǎng)后，可能會觀察到更多的絮狀沉淀，所以將血清放在培養(yǎng)箱中做無菌試驗并不能直接判定血清被污染了。我們可以將血清加到細(xì)菌培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否有細(xì)菌生長，也可以進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察是否有污染。
四、血清沉淀物該怎么去除？
血清中出現(xiàn)沉淀物后，可以將血清分裝到無菌離心管中，以400~600g離心5min，將上清液加入到培養(yǎng)基中一起過濾。注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這很可能會堵塞過濾膜，并且直接過濾血清，也可能會導(dǎo)致血清中部分營養(yǎng)成分的流失。
五、如何避免血清中出現(xiàn)沉淀物？
1、采取正確的解凍方法
（1）2~8℃過夜，使之部分融解
（2）再放到室溫條件下使之完全融解
（3）在融解過程中需要規(guī)則地?fù)u晃均勻
2、采取正確的使用和保存方法
（1）非必要不滅活，熱滅活會使血清中部分蛋白質(zhì)變性析出，影響血清品質(zhì)
（2）避免在37℃下預(yù)熱血清，在室溫條件下預(yù)熱即可
（3）使用過程中，避免反復(fù)凍融
（4）避免紫外線照射
（5）避免在2~8℃條件下長期保存，可以將血清分裝后在-15~-20℃的環(huán)境中長期保存
（6）避免在室溫條件下放置太長時間
常見的血清沉淀有以下幾種：
纖維蛋白：纖維蛋白是經(jīng)常出現(xiàn)的較大的沉淀物，可以達(dá)到1~2mm，可以用肉眼觀察到。由于在生產(chǎn)過程中，血清采集、過濾和罐裝處理都是在低溫條件下快速完成的，血清中的纖維蛋白原處于溶解狀態(tài)，但在解凍后，血清中的纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。
磷酸鈣：常見的一種沉淀物，會造成血清渾濁，并且在37℃培養(yǎng)的時候會增加，這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點，這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此通常會被誤認(rèn)為是微生物污染。
其他：膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質(zhì)也是血清中出現(xiàn)沉淀的常見原因。
二、血清沉淀物對細(xì)胞培養(yǎng)有什么影響？
血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，經(jīng)過我們的試驗以及細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗表明，血清沉淀物不會影響細(xì)胞培養(yǎng)。
三、血清沉淀物是不是污染？
血清沉淀物中，磷酸鈣往往會被誤認(rèn)為是微生物污染，特別是在37℃條件下培養(yǎng)后，可能會觀察到更多的絮狀沉淀，所以將血清放在培養(yǎng)箱中做無菌試驗并不能直接判定血清被污染了。我們可以將血清加到細(xì)菌培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否有細(xì)菌生長，也可以進(jìn)行革蘭氏染色，在油鏡下觀察是否有污染。
四、血清沉淀物該怎么去除？
血清中出現(xiàn)沉淀物后，可以將血清分裝到無菌離心管中，以400~600g離心5min，將上清液加入到培養(yǎng)基中一起過濾。注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這很可能會堵塞過濾膜，并且直接過濾血清，也可能會導(dǎo)致血清中部分營養(yǎng)成分的流失。
五、如何避免血清中出現(xiàn)沉淀物？
1、采取正確的解凍方法
（1）2~8℃過夜，使之部分融解
（2）再放到室溫條件下使之完全融解
（3）在融解過程中需要規(guī)則地?fù)u晃均勻
2、采取正確的使用和保存方法
（1）非必要不滅活，熱滅活會使血清中部分蛋白質(zhì)變性析出，影響血清品質(zhì)
（2）避免在37℃下預(yù)熱血清，在室溫條件下預(yù)熱即可
（3）使用過程中，避免反復(fù)凍融
（4）避免紫外線照射
（5）避免在2~8℃條件下長期保存，可以將血清分裝后在-15~-20℃的環(huán)境中長期保存
（6）避免在室溫條件下放置太長時間
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