EAE模型-( 實驗性自身免疫性腦脊髓炎動物模型)操作

實驗耗材：
1）無菌陶瓷研缽1個
2）5ml玻璃注射器
3）振蕩器
4）28G一次性注射針頭
5）18G一次性注射針頭
6）1ml一次性注射器
7）一次性三通管1個
8）一次性塑料試管

實驗周期：約2周

試劑配制：
1.少突膠質細胞髓磷脂糖蛋白（MOG）準備：
1）準備完全弗氏佐劑（CFA結核菌素（Mtb）粉末溶于不完全弗氏佐劑而成（終濃度為4mg/ml）。將100mg結核菌素粉末與不完全弗氏佐劑混合，每次加入一點點不完全弗氏佐劑，在研缽中充分研磨保證結核菌素完全懸浮。
PS:也可直接購買即用型的完全佐劑（Chondrex cat#7001 4mg/ml ,）
2）MOG35-35：即用型-20℃保存。
3）1:1混合MOG和Mtb/CFA（終濃度為1mg/ml）。使用三通管使之混合和乳化，保存于4℃冰箱，并于24小時內使用
2、百日咳毒素（PTX）：50μg毒素和500μl PBS做成濃度為100μg/ml體系，保存于4℃冰箱。使用時按1:100稀釋（終濃度為1μg/ml），腹腔注射200μl/只小鼠

步驟：
1、第一天：小鼠胸腹部皮下注射接種MOG和Mtb/CFA（終濃度為1mg/ml）混合液：腹側2-4個點，共150μl/只。再腹腔注射百日咳毒素（PTX），200μl/只小鼠
2、第三天：腹腔內注射百日咳毒素（PTX），200μl/只小鼠。
CHO細胞實驗—依照Hewlett et al.方法，產生陽性反應（CHO簇聚生長模式）所需PTX的低濃度為0.03ng/ml；依批次不同而有變 化。
腺苷酸環化酶實驗：依照Wolff et al方法，在含1 μM鈣調蛋白的體系中，PTX的腺苷酸環化酶活性是9 picomoles/min/μg。依照 批次不同會有差異。
主要應用： PTX常與MOG（35-55），PLP（139-151），PLP（178-191）等免疫肽聯合注射動物，從而建立實驗性自身免疫性腦脊髓炎 （Experimental Autoimmune Encephalomyelitis，EAE）模型，即用來研究多發性硬化癥（Mutiple sclerosis，MS）的常用動物模 型。
List labs提供三種配方形式的百日咳毒素（Pertussis toxin，PTX），分別是甘油溶液（貨號：listlabs 179），溶于緩沖液的凍干粉（貨號： listlabs 180），以及溶于純水的凍干粉（貨號：listlabs 181）。三種形式的百日咳毒素。

白喉毒素在構建細胞特異性細胞毒性免疫毒素中可用作毒素元素。具有天然內體逃逸機制的細菌毒素易位結構域已被用于開發有效的非病毒載體用于基因治療。