Q1：HPLC方法開發(fā)中最大的挑戰(zhàn)是什么？

A1：最大的挑戰(zhàn)有兩個(gè)。第一是化合物之間的分離度問(wèn)題，色譜分析的前提是分離，只有充分分離才能精確地定量（使用MS作為檢測(cè)器時(shí)對(duì)于非同分異構(gòu)體等情況例外）；第二是分析物色譜峰的峰形，當(dāng)峰形不佳的時(shí)候（可以用拖尾因子、柱效等來(lái)衡量），也會(huì)影響分析物的定量和分離。

Q2：有哪些方法可以解決分離度的問(wèn)題？

A2：1990年研究人員對(duì)這個(gè)問(wèn)題進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，認(rèn)為分離度Rs主要由三個(gè)因素決定，也就是柱效N，選擇性α和保留因子k（如下圖）。這些年來(lái)的很多技術(shù)革新都是通過(guò)提高N來(lái)提高分離度，比如設(shè)計(jì)了核殼硅膠作為色譜柱填料基質(zhì)或者用UPLC儀器搭配小粒徑（亞2 μm）顆粒填料。但更根本和有效的途徑是通過(guò)改變選擇性來(lái)實(shí)現(xiàn)分離，也就是改變難分離的化合物與固定相和流動(dòng)相之間的作用力，從下圖中也可以看到，通過(guò)改變選擇性可以有效改善分離度。

Q3：有哪些方法可以改變選擇性？

A3：改變選擇性的方法同樣很多。最重要的就是從三個(gè)角度出發(fā)：分析物本身、流動(dòng)相以及固定相。對(duì)于可離子化的分析物，根據(jù)化合物的pKa針對(duì)性地改變流動(dòng)相pH可以有效改變選擇性；另外，由于常用的溶劑（正相中的乙醇、異丙醇，反相中的甲醇、乙腈）之間的在氫鍵、極性作用等的差異比較大，因此改變流動(dòng)相時(shí)常常也會(huì)有效改善選擇性；另外，可以根據(jù)難分離的化合物之間的差異，針對(duì)性地選擇可以識(shí)別這些差異的色譜柱，比如π-π作用、氫鍵作用、偶極-偶極作用、疏水作用、離子交換作用、形狀選擇性等，通過(guò)選擇合適的色譜柱往往也能達(dá)到出奇制勝的效果。

Q4：峰形問(wèn)題有哪些原因和解決辦法？

A4：解決峰形問(wèn)題最關(guān)鍵的是找對(duì)原因。造成峰形問(wèn)題的原因有很多，但是大部分是化合物本身的原因，比如含有與固定相產(chǎn)生強(qiáng)作用的基團(tuán)（如含N的堿性基團(tuán)、螯合基團(tuán)等），或者含有在某些流動(dòng)相條件下會(huì)互變的基團(tuán)等。至于解決辦法，就需要對(duì)癥下藥，比如對(duì)于前者就需要在流動(dòng)相中加入添加劑或者選擇更“惰性”的柱子，對(duì)于后者就需要選擇更合適的流動(dòng)相條件。

Q5：星譜科技所提供的色譜柱有哪些優(yōu)勢(shì)？

A5：星譜科技目前主要提供英國(guó)Horizon公司的色譜柱，這些色譜柱的主要優(yōu)勢(shì)有三個(gè)：第一，它的多款色譜柱具有獨(dú)特的選擇性，在解決分離度問(wèn)題方面很有優(yōu)勢(shì)，比如C18/AR、C18/PFP和amide 18等復(fù)合型固定相設(shè)計(jì)，可以在保留C18疏水性的基礎(chǔ)上引入比如π-π作用、氫鍵作用、偶極-偶極作用等；第二，幾乎所有的這些鍵合固定相都有核殼硅膠基質(zhì)類型填料可供選擇，保證在好的選擇性的同時(shí)具有高柱效，從而獲得更好的分離度；第三，Horizon色譜柱選擇的硅膠都是超純、超惰性的硅膠，可以盡量降低因分析物和硅膠表面的作用而造成的峰形問(wèn)題。總結(jié)來(lái)說(shuō)，Horizon色譜柱是解決色譜分析中分離度和峰形問(wèn)題的利器。同時(shí)，星譜科技的技術(shù)人員對(duì)色譜柱也有深刻的理解，因此可以根據(jù)用戶的具體項(xiàng)目需要更精準(zhǔn)地推薦色譜柱，節(jié)約方法開發(fā)的時(shí)間。