細胞都沒有絕對固定的培養條件,只是更加適合。所以在培養的時候我們需要不斷的優化和改進培養方式,以便得到更好的細胞,比如在MEM中培養的細胞,很可能在DMEM或M199中也很容易生長。總之,MEM是貼壁細胞最好的選擇,而 RPMI-1640是懸浮細胞培養一個好的開始,當然,這是在對細胞培養條件不明確的時候的明智之舉,當培養條件有標注的時候,需要按照標注的來進行,因為好的細胞會給實驗帶來意想不到的效果
L-谷氨酰胺和GlutaMAX-I
L-谷氨酰胺(中喬新舟,貨號:CSP012)在脫掉氨基后可作為培養細胞的能量來源、多參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解,而 L-谷氨酰胺的降解會導致氨的形成,氨對細胞有毒性,故敏感細胞不建議使用。一般培養細胞建議使用GlutaMAX-I(中喬新舟,貨號:CSP004),因為GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同條件下,L-谷氨酰胺幾乎完全降解。
酚紅:酚紅在培養基中被用來作為PH值的指示劑:中性時為紅色,酸性時為黃色,堿性時為紫色。研究表明,酚紅可以模擬固醇類激素的作用,(特別是雌激素)。為避免固醇類反應,培養細胞,尤其是哺乳類細胞時,用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測,一些研究人員在做流式細胞檢測時,不使用加有酚紅的培養基。
臺盼蘭怎么計數活細胞?
用無血清培養基把細胞懸液稀釋到200~2000個/毫升,在0.1毫升的細胞懸液中加入0.1毫升的0.4%的臺盼蘭溶液。輕輕混勻,數分鐘后,用血球計數板計數細胞。活細胞排斥臺盼蘭,不會有任何變化,而染成藍色的細胞就是死細胞。