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預(yù)處理法提取土壤DNA

瀏覽次數(shù):5743 發(fā)布日期:2018-1-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

預(yù)處理法提取土壤DNA

實(shí)驗(yàn)試劑

1.      TENP緩沖液:50 mM Tris,20 mM EDTA,100mM NaCl,1% PVPP,pH10

2.      PBS緩沖液:137 mM NaCl,2.7 mM KCl,10 mM Na2HPO4,2 mM KH2PO4,pH7.4

3.      DNA提取緩沖液: TrisBase 0.1M, EDTA 0.1M, NaCl 1.5M, CTAB 1%

4.      溶菌酶(10 mg/ml)

5.      蛋白酶K(20 mg/ml)

6.      SDS (20%,m/V)

7.      氯仿:異戊醇(24:1)

實(shí)驗(yàn)步驟

1.        取1 g土壤,加入6 ml TENP緩沖液,渦旋震蕩混勻10 min,12000 rpm離心5 min,棄上清,重復(fù)洗滌3次;

2.        土壤沉淀再加入6 ml PBS緩沖液,洗滌一次,棄上清;

3.        加入37 ℃預(yù)熱的13.5 ml DNA提取緩沖液,再加入100 μl溶菌酶,50 μl蛋白酶K,水平搖床上225 rpm,37 ℃搖動(dòng)30 min;

4.        再加入1.5 ml SDS,65 ℃水浴2 h,其間間隔20 min混勻一次;

5.        6000 g室溫離心15 min,上清液轉(zhuǎn)入新的離心管中;

6.        分別加入等體積的氯仿:異戊醇(24:1),混勻,6000 g離心15 min,取上清,重復(fù)抽提一次;加入0.6倍體積的異丙醇,室溫放置1 h;

7.        15000 rpm室溫離心20 min,沉淀用70%乙醇清洗2次,風(fēng)干;

8.        用100 μl無菌去離子水重新懸浮。

發(fā)布者:上海澤葉生物科技有限公司
聯(lián)系電話:021-61998551
E-mail:shzeysw@163.com

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