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血清外泌體中的miRNA作為KD診斷biomarker

瀏覽次數:2312 發布日期:2017-6-1  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

研究背景

皮膚粘膜淋巴結綜合癥(muco-cuta-meous lymph node syndrome,MCLS)又稱川崎病(Kawasaki disease),是一種以全身血管炎變為主要病理的急性發熱性出疹性小兒疾病。雖然已有的研究已經發現一些血來源的蛋白分子或者miRNA有潛在的診斷能力,但是,其有效性還有待提高。外泌體,一種包含了細胞特異性信息的囊泡結構,保護了內部的分子免受胞外酶類的降解。因此,通過檢測的外泌體中的遺傳物質,是尋找可靠診斷biomarker的理想方式。本研究從檢測血清外泌體中的miRNA入手,篩選了可用于KD特異性診斷biomarker的潛在分子。

研究思路

研究結果

1. 外泌體分離與確認

通過SBI的ExoQuick試劑盒分離,研究人員得到了KD病人,正常人,和IVIG治療后病人的血清外泌體。電鏡觀察與CD9, CD81 和TSG101三個marker蛋白鑒定,研究人員確認了從血清中分離出來了的外泌體分子。

2. 外泌體中KD特異性miRNA篩選

為尋找到能特異性反映KD特征的biomarker,研究人員運用miRNA表達譜芯片(伯豪生物提供),比較了外泌體中的miRNA表達差異。分析顯示,miR-1260a,miR-4701-5p, miR-885-5p, miR-328 和miR-197-3p,在KD組中上調,而在IVIG治療后又下調。

3. 外泌體中miRNA表達驗證

為驗證芯片結果的可靠性,研究人員對11個候選的miRNA,在其他獨立的60個樣本(20個健康人,20個KD病人,20個IVIG治療病人)和5個腺病毒感染病人(ADV)進行了驗證。由于目前沒有外泌體中的miRNA內參基因,研究人員把每一個的表達情況與所有11個比較作為參考。結果顯示,miR-1246/miR-4436b-5p在KD和正常人,IVIG治療與KD中差異顯著,在正常人和IVIG治療中不顯著;miR-197-3p/miR-671-5p則只在ADV和KD中差異顯著。

4. KD診斷biomarker模型驗證

為驗證上述篩選到的biomarker的有效性,研究人員用另外兩個醫院的樣本進行了驗證。這些病人包括54個健康個體,54個KD病人,10個ADV病人,13個EBV病人,12個JIA病人和1個SF病人。兩個醫院的病人(Centre 1和 Centre 2)的盲測結果顯示,KD病人基本能和非KD病人區分開來。因此,通過檢測外泌體中的上述4個miRNA的表達, 可以作為潛在的KD診斷biomarker。

研究結果

本研究通過篩選血清外泌體中的miRNA,運用表達譜芯片找到了KD病人特異性表達的miRNA。后期通過大量的病人樣本,健康樣本和其他類似疾病樣本驗證,表明其找到的miRNAs可以作為KD特異性的診斷指標。該研究從外泌體的角度為KD診斷提供了新的思路,作為其他疾病研究的小伙伴們,該研究還是可以參考的。

原文出處:
Jia HL, Liu CW, Zhang L, et al.Sets of serum exosomal microRNAs as candidate diagnostic biomarkers for Kawasaki disease. Sci Rep. 2017 Mar 20;7:44706.
發布者:上海伯豪生物技術有限公司
聯系電話:021-58955370
E-mail:market@shbio.com

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