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人核轉錄因子elisa試劑盒使用說明書

瀏覽次數:2499 發布日期:2012-7-27  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
                                        人核轉錄因子elisa試劑盒使用說明書
人elisa試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍                                                     
 80 ng/L -2000 ng/L
 
使用目的
  本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中核轉錄因子(NF-kB )含量。

實驗原理
  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人核轉錄因子(NF-kB )水平。用純化的人核轉錄因子(NF-kB )抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入核轉錄因子(NF-kB ),再與HRP標記的核轉錄因子(NF-kB )抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的核轉錄因子(NF-kB )呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人核轉錄因子(NF-kB )濃度。

試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(4000 ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
人elisa試劑盒操作步驟
標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2000 ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
1000 ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
500 ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
250 ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
125 ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
發布者:上海滬峰生物科技有限公司
聯系電話:021-61726286,021-60520826,60520633
E-mail:shhfsw010@163.com

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