大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

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大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒

(用于血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi))

原理

本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 ACTH 單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 ACTH與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠ACTH，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色，最后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值，ACTH濃度與OD值成正比，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中ACTH濃度。

試劑盒組成（2-8℃保存）

酶標(biāo)板（Coated Wells）	96孔	酶標(biāo)抗體工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×標(biāo)本稀釋液（Sample Buffer）	12ml	20×濃縮洗滌液（Wash Buffer）	50ml
標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：250ng/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗體工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	終止液（Stop Solution）	12ml

準(zhǔn)備試劑與收集血樣

1. 收集標(biāo)本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí)；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融。。血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清可能需要稀釋,請(qǐng)先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù)。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成250ng/ml的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管，第一管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul。在第一管中加入250ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?00ul棄去。第八管為空白對(duì)照。

3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。

4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）

檢測(cè)程序

1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘。

2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干。

3. 每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。

4. 洗板：同前。

5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。

6. 洗板：同前。

7. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。

8. 每孔加入100ul終止液混勻。

9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。