ABI 3730XL測(cè)序平臺(tái)的原理及特點(diǎn)

瀏覽次數(shù)：13784　發(fā)布日期：2011-6-8　來(lái)源：上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司

Applied Biosystems 3730XL測(cè)序儀是高質(zhì)量的長(zhǎng)片段讀取和序列分析的測(cè)序平臺(tái)，應(yīng)用靈活而廣泛。3730XL可同時(shí)分析96個(gè)樣品，該儀器采用4色熒光同時(shí)檢測(cè)，可不間斷24小時(shí)運(yùn)行，自動(dòng)灌膠，上樣，電泳分離，檢測(cè)及數(shù)據(jù)分析。本儀器除了能夠完成新基因測(cè)序工作或比較測(cè)序工作外，還可進(jìn)行多種片段分析，包括微衛(wèi)星 DNA 分析，比較基因型分析，單核苷酸多態(tài)性 (SNP) 研究等。

ABI 3730XL測(cè)序儀

測(cè)序峰圖

雙脫氧鏈終止法原理

雙脫氧鏈終止法又稱為Sanger法，其原理是DNA模板在DNA聚合酶、引物、四種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)存在下進(jìn)行復(fù)制時(shí)，在四管反應(yīng)體系中分別按一定的比例引入四種雙脫氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3’-OH基團(tuán)，當(dāng)ddNTP摻入鏈的末端時(shí)，該鏈就會(huì)停止延伸。如此每管反應(yīng)體系中就產(chǎn)生了一系列長(zhǎng)度不等的以ddNTP為3’端的DNA片段。反應(yīng)終止后，分4個(gè)泳道進(jìn)行凝膠電泳以分離長(zhǎng)短不一的DNA片段，相鄰的片段長(zhǎng)度相差一個(gè)堿基。經(jīng)放射自顯影后，根據(jù)片段3’端的雙脫氧核苷，便可獲得合成片段的堿基排列順序。

Sanger法測(cè)序原理圖

ABI 3730XL測(cè)序儀技術(shù)原理

ABI 3730XL自動(dòng)測(cè)序儀是基于毛細(xì)管電泳和熒光標(biāo)記技術(shù)的DNA測(cè)序儀。基于Sanger法，3730XL測(cè)序儀擁有96道毛細(xì)管，并用熒光標(biāo)記代替了同位素標(biāo)記，從而大大提高了DNA測(cè)序的速度和準(zhǔn)確性。4種雙脫氧核苷酸(ddNTP)的堿基分別用不同的熒光進(jìn)行標(biāo)記，在通過(guò)毛細(xì)管時(shí)不同長(zhǎng)度的DNA片段上的4種熒光基團(tuán)被激光激發(fā)，發(fā)出不同顏色的熒光，被CCD檢測(cè)系統(tǒng)識(shí)別，并直接翻譯成DNA序列。