天天干亚洲_99久久免费国_亚洲国产精品成人久久久软件_亚洲成av人**亚洲成av**_精品中文字幕在线AⅤ_男女真实毛片视频图片

English | 中文版 | 手機版 企業登錄 | 個人登錄 | 郵件訂閱
當前位置 > 首頁 > 技術文章 > Elisa實驗—ELISA板包被原理、操作步驟及常見問題解答

Elisa實驗—ELISA板包被原理、操作步驟及常見問題解答

瀏覽次數:126 發布日期:2025-7-16  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

  Elisa實驗:ELISA板包被原理

  ELISA板包被原理

  在ELISA(酶聯免疫吸附試驗)實驗中,包被(Coating) 是最關鍵的第一步,目的是將目標分子(抗原或抗體)固定在微孔板表面,以便后續與檢測物(抗體或抗原)結合。以下是·本生小編對ELISA板包被的詳細原理和步驟的總結:

  1. 包被的基本原理

  包被的本質是通過物理吸附或化學偶聯的方式,將蛋白質(抗原/抗體)固定在微孔板(通常是聚苯材質)的孔壁上。

  (1) 物理吸附(被動包被)

  原理:聚苯yixi表面具有疏水性,蛋白質在堿性緩沖液(如pH 9.6的碳酸鹽緩沖液)中會因疏水相互作用和靜電吸附而被動結合到孔板表面。

  適用對象:

  大多數蛋白質(如抗體、重組抗原、病毒蛋白等)。

  不能用于小分子(如半抗原、肽段<10個氨基酸),因為它們吸附能力弱。

  (2) 化學偶聯(主動包被)

  原理:通過化學交聯劑(如EDC/NHS)將蛋白質的氨基(-NH₂)或羧基(-COOH)與微孔板表面的活性基團共價結合。

  適用對象:

  小分子抗原(如藥物、激素、短肽)。

  多糖、脂類等不易吸附的分子。

 

 

  2. 包被的關鍵步驟

  (1) 包被緩沖液的選擇

  常用緩沖液:

  碳酸鹽緩沖液(pH 9.6):最常用,促進蛋白質吸附。

  PBS(pH 7.4):適用于某些對pH敏感的蛋白。

  蛋白濃度:通常1-10 μg/mL(需優化,過高會導致多層吸附,過低則信號弱)。

  (2) 包被條件

  溫度:

  4℃過夜(16-18h):最穩定,蛋白變性風險低。

  37℃ 1-2h:快速包被,但可能影響某些蛋白活性。

  體積:每孔50-100 μL(確保完全覆蓋孔底)。

  (3) 封閉(Blocking)

  包被后,孔板表面仍存在未結合位點,需用封閉劑(如BSA、脫脂奶粉、酪蛋白)封閉,防止非特異性結合。

  封閉液:1-5% BSA或5%脫脂奶粉(PBS/TBS配制)。

  封閉時間:37℃ 1-2h 或 4℃過夜。

  3. 影響包被效率的因素

  因素影響

  pH堿性(pH 9.6)促進蛋白吸附,酸性(pH <7)可能降低吸附效率。

  離子強度低鹽緩沖液(如碳酸鹽)比高鹽(如PBS)更利于吸附。

  蛋白性質疏水性蛋白吸附更強,親水性蛋白可能需要化學偶聯。

  微孔板材質高結合力板(如Covalink板)適合小分子,普通板適合大分子。

  溫度和時間低溫(4℃)長時間包被更穩定,高溫(37℃)可能加速蛋白變性。

  4. 常見問題及解決方案

  Q1: 包被后信號弱?

  可能原因:蛋白濃度過低、包被時間不足、緩沖液pH不合適。

  解決方案:優化蛋白濃度(梯度測試),延長包被時間,調整緩沖液pH。

  Q2: 背景高(非特異結合)?

  可能原因:封閉不充分、洗滌不徹底、抗體交叉反應。

  解決方案:增加封閉時間,更換封閉劑(如改用酪蛋白),優化洗滌次數。

  Q3: 小分子如何包被?

  解決方案:采用化學偶聯法(如EDC/NHS)或先偶聯載體蛋白(如BSA-半抗原結合)。

  5. 總結

  被動包被(物理吸附):適用于大多數蛋白質,簡單但可能不適合小分子。

  主動包被(化學偶聯):適用于小分子抗原,需交聯劑輔助。

  封閉是關鍵:防止非特異結合,提高信噪比。

  如果需要特定實驗方案(如抗原包被、抗體檢測等),可進一步優化緩沖體系和包被條件!

  Elisa板:

培養板 Elisa板 天津本生

  注:以上資料僅供參考,不作為實驗依據,如需完整版產品信息請咨詢品牌供應商或技術老師。

  天津本生一直視質量控制為企業的生命,追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創美好的未來。次性滅菌吸頭(一次性滴管無菌獨立包裝)

發布者:本生(天津)健康科技有限公司
聯系電話:18502669006
E-mail:215771467@qq.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊 忘記密碼
評論只代表網友觀點,不代表本站觀點。 請輸入驗證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com
主站蜘蛛池模板: 欧洲精品一区二区三区在线观看 | 国产精品爱selaoban | 大学生一级一片第一次野外 | 一本无码中文字幕手机在线 | 亚洲国产成人精品女人久久久久 | 欧美猛交 | 樱空桃AⅤ无码视频在线播放 | 国产精品久久久久久久久久辛辛 | 羞羞色院91精品网站 | 国产亚洲成人精品 | 乱人伦人妻精品一区二区 | 亚洲AV无码国产精品麻豆天美 | 国产美女无遮挡免费 | 国产女主播高潮在线播放 | 成人久久久| 国产精选一区 | 久久一区视频 | 久久我不卡 | 牛牛精品专区在线 | 国产一二三在线观看 | 久久久久久国产精品三级 | 国产精品久久久国产 | JLZZ大全高潮多水老师 | 国产在线精品一区二区中文 | 浮生影视在线观看免费高清 | 9999777做爰| 在线看片免费人成视频福利 | 国产伊人一区二区三区在线观看 | 国产精品一区二区日韩 | 国产国语一级毛片在线放 | 欧美精品99久久久久久人 | 国产热の有码热の无码视频 | 一级做受毛片免费大片一级做 | 7777888色淫网站免费视频 | 国产精品久久久久久久久久久免费看 | 国产中文字幕一区二区三区 | 成人国产一区二区 | 中文亚洲av片在线观看 | 91 免费看片 | 大桥未久视频在线观看 | 一本大道加勒比久久综合 |