慢性B淋巴細(xì)胞白血病（B-CLL）是最常見(jiàn)的血液癌癥，具有高度的基因組異質(zhì)性，目前研究多集中在基因組和轉(zhuǎn)錄組水平，對(duì)蛋白質(zhì)組，尤其是蛋白磷酸化修飾的功能及影響了解甚微。蛋白磷酸化是調(diào)控細(xì)胞信號(hào)的翻譯后關(guān)鍵修飾，與 CLL 的信號(hào)通路密切相關(guān)，如 B 細(xì)胞抗原受體（BCR）的 tonic 信號(hào)傳導(dǎo)（低水平持續(xù)激活）在 CLL 發(fā)展中起關(guān)鍵作用，涉及 LYN、SYK 等酪氨酸激酶。現(xiàn)有治療如 BTK 抑制劑（伊布替尼）和 BCL-2 抑制劑（維奈托克）雖有效，但存在耐藥性和自身微環(huán)境影響等問(wèn)題，且缺乏早期診斷和個(gè)性化治療的生物標(biāo)志物。整合蛋白質(zhì)芯片和質(zhì)譜等高通量篩選技術(shù)為分析蛋白質(zhì)組的磷酸化提供了可能。

 

文章題目為“Tonic signaling of the B-cell antigen-specific receptor is a common functional hallmark in chronic lymphocytic leukemia cell phosphoproteomes at early disease stages”于2025年3月發(fā)表在Molecular Oncology雜志，作者來(lái)自于西班牙薩拉曼卡大學(xué)腫瘤研究中心。

在本研究中，19 例CLL樣患者（18 例 B-CLL 和 1 例 CLL ）為研究對(duì)象。首先采集外周血（PB），流式細(xì)胞儀純化 CD19?、CD5?的腫瘤 B 細(xì)胞，純度 > 98%，凍存于液氮中備用。隨后使用含尿素的裂解緩沖液（尿素、磷酸酶抑制劑等）裂解細(xì)胞，超聲處理后離心收集上清液，并測(cè)定蛋白濃度。通過(guò)磷酸酪氨酸抗體免疫親和法富集磷酸肽，使用質(zhì)譜儀分析總蛋白和磷酸化肽段。蛋白組分析檢測(cè)到 13,504 個(gè)獨(dú)特肽段，對(duì)應(yīng) 2,970 個(gè)蛋白質(zhì)，其中 28 個(gè)為新發(fā)現(xiàn)蛋白；蛋白磷酸化分析鑒定到 594 個(gè)磷酸肽段，對(duì)應(yīng) 316 個(gè)磷酸化蛋白，包括 55 個(gè)新發(fā)現(xiàn)磷酸肽段。英國(guó)ArrayJet生物芯片點(diǎn)樣儀制備蛋白質(zhì)芯片，檢測(cè)磷酸化蛋白表達(dá)。將 208 種抗體（靶向 162 種蛋白）點(diǎn)印在氨基修飾的玻片上，隨后孵育生物素標(biāo)記的蛋白以及Cy5標(biāo)記的鏈霉親和素， 雜交后使用熒光芯片掃描儀進(jìn)行熒光信號(hào)分析。

圖1：實(shí)驗(yàn)流程，從蛋白質(zhì)組學(xué)和磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析到親和蛋白質(zhì)組學(xué)（蛋白質(zhì)微陣列）和WB驗(yàn)證。B-CLL： b細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血病；CLL：慢性淋巴細(xì)胞白血病；ESI-HCD：高能碰撞解離的電噴霧電離；（ESI）LC-MS /MS：液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜；MBL：?jiǎn)慰寺�b細(xì)胞淋巴細(xì)胞增多癥；PTM：翻譯后修飾；WB,：western blot。

研究發(fā)現(xiàn)在2160個(gè)共表達(dá)蛋白中，有10%（220 個(gè)）發(fā)生了磷酸化，其主要參與 B 細(xì)胞激活和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；BCR的 tonic 信號(hào)傳導(dǎo)和 NF-κB/STAT3 通路是 CLL 和 MBL 磷酸化組的共同特征。55 個(gè)新磷酸肽的發(fā)現(xiàn)擴(kuò)展了 CLL 磷酸化組數(shù)據(jù)庫(kù)，為機(jī)制研究提供了可能的潛在靶點(diǎn)，并發(fā)現(xiàn)9 個(gè)磷酸化蛋白（如 BTK、SYK）與早期疾病階段高度相關(guān)，可用于預(yù)后評(píng)估和治療監(jiān)測(cè)。整合多組學(xué)技術(shù)（質(zhì)譜、蛋白質(zhì)篩選芯片），提供了CLL蛋白質(zhì)組和磷酸化組的全景圖譜，為理解疾病異質(zhì)性、開(kāi)發(fā)新型生物標(biāo)志物奠定了基礎(chǔ)。

原文鏈接：https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/1878-0261.70032

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