核酸脂質(zhì)納米粒后處理注意事項：粒徑測定與除溶劑

瀏覽次數(shù)：1385　發(fā)布日期：2021-9-8　來源：锘海

在我們使用微流控或其他方法合成核酸脂質(zhì)納米粒后，成品溶液常常因有機溶劑的存在而極不穩(wěn)定。以常見的微流控水相、有機相合成比3:1為例，有機相溶劑常使用無水乙醇，在混合后仍然有高達25%的含量。高濃度的乙醇將逐漸破壞溶液中的納米粒子，使其粒徑逐漸增大。有的甚至能在短短數(shù)小時內(nèi)由50 nm增長到200 nm，嚴重影響實驗結(jié)果和方案評估，所以合理、及時的后處理尤為重要。通常而言，后處理等同于除溶劑，但一般也會對溶液中的納米粒子進行粒徑測定。

粒徑測定通常使用動態(tài)光散射粒度儀，需要注意的是，不同品牌的粒度儀對于同一個樣品的檢測結(jié)果會有些許差別。另外，在檢測過程中，需要注意待測液體的濃度和溫度對結(jié)果造成的影響：一般而言，濃度過高的液體因散射光被大量粒子阻擋，所測出的粒徑偏差較大；而溫度決定了粒子布朗運動強度，溶液溫度沒有平衡前也會影響粒徑的檢測結(jié)果。

除溶劑則通常采用超濾或透析。超濾為主動式，速度快；透析為被動式，速度慢。有些科研工作者可能會擔(dān)心超濾的方式過于猛烈，導(dǎo)致納米粒子的破壞。對于這一點其實沒有必要過于擔(dān)心，一方面在超濾的過程中，并不會完全將溶劑去除——通常在剩1 – 2 mL時就停止離心；另一方面超濾相對于透析更快，雖有極少量的納米粒子破壞，卻避免了有機溶劑長期留存帶來的影響，兩害取其輕，超濾仍舊是除溶劑的有效辦法。

超濾管

測粒徑和除溶劑的具體步驟如下：
1. 完成納米粒子的合成后（假定成品1 mL），立刻用去鈣去鎂的D-PBS進行40倍稀釋，體積為40 mL。稀釋后取0.5 – 1 mL左右進行粒徑測定，剩余39 – 39.5 mL執(zhí)行剩余步驟以除溶劑。

2. 將剩余溶液倒入超濾管中，室溫（20℃）下以2000×g的速度離心5 – 30 min，離心時間依超濾管孔徑大小而有所區(qū)別，第一次嘗試時可以密切關(guān)注超濾管中的液體，以剩余1 – 2 mL為停止信號。

3. 取出超濾管，將下方液體倒出，在超濾管上方繼續(xù)添加剩余溶液（如果步驟2沒有完全倒入超濾管中的話），并用移液槍吸取管中液體沖洗濾膜數(shù)次，按步驟2的參數(shù)再次超濾。

4. 重復(fù)步驟2 – 3，直至溶液全部濃縮至1 mL左右。用移液槍吸取管中液體沖洗濾膜數(shù)次后將液體全部吸出轉(zhuǎn)移并在生物安全柜中過0.2 μm濾膜除菌（如不進行生物實驗則無需除菌）后，即為最終品。

得到最終品后，就可根據(jù)使用者的實際需求稀釋成相應(yīng)濃度，并進行動物或細胞實驗。

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納米藥物制備系統(tǒng)