本期我們想說說懸浮細胞
比起貼壁細胞，懸浮細胞不需要消化
養(yǎng)起來更方便、省心
但也沒那么簡單
總是會遇到一點問題：
為什么總是出現(xiàn)死細胞，
說好了傳代很easy的，
冷凍、復(fù)蘇又出現(xiàn)問題了！

關(guān)于懸浮細胞，你知道多少？

• 懸浮細胞生長不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)。

• 懸浮培養(yǎng)的細胞一般為淋巴細胞或血液系統(tǒng)來源的細胞（如人胃癌細胞SNU-5，小鼠白血病細胞WEHI-3, 人白血病細胞K-562, HL-60），這種細胞體積小，它們天生就生活在懸液（血液）中。由于缺乏黏附分子的表達，在培養(yǎng)基中呈現(xiàn)懸浮狀態(tài)，細胞大體呈球形或橢球型。

圖為K-562細胞，來源于ATCC

關(guān)于懸浮 de 傳代

1. 懸浮細胞無需通過酶的作用使其從培養(yǎng)容器表面脫離，整個過程較為迅速，對細胞的損傷也較小。通常有兩種方法：

• 直接給帶傳代的培養(yǎng)瓶中補充一定量的新鮮培養(yǎng)基，然后分裝。

• 先通過離心棄掉營養(yǎng)匱乏的舊培養(yǎng)基，再用適量的新鮮培養(yǎng)基重懸細胞沉淀。

2. 至于何時傳代，最準(zhǔn)確的是根據(jù)細胞密度來確定。傳代最大細胞密度隨細胞系不同而有所差異，ATCC細胞庫里提供的細胞培養(yǎng)信息，里面有培養(yǎng)條件選項，會詳細說明細胞的接種密度和培養(yǎng)密度，有的還有圖片或參考產(chǎn)品使用手冊。

如何有效去除死細胞？

細胞復(fù)蘇或培養(yǎng)過程中常會出現(xiàn)死細胞和細胞碎片，可通過低速離心的方法去除死細胞或細胞碎片，死亡細胞的碎片會留在上清中，即可除去。不同細胞離心力可能不一樣，可以先試一下300×g~500×g這個離心力，如果能離下大部分細胞就行，如果一點細胞都離不下來就適當(dāng)加大離心力和時間。

 BI教您做好懸浮細胞的凍存和復(fù)蘇 

1. 凍存
我們推薦使用BI的無血清凍存液，直接按以下步驟進行，操作更加方便，平均活細胞回收比例超過90%：

• 以200×g-300×g離心3分鐘，棄去上清，收集細胞。

• 用BI無血清凍存液將細胞重懸（不需回溫），將細胞密度調(diào)整為3~5x10⁶ cells/ml，添加到凍存管中（一般每管1ml）。

• 建議將含有細胞懸液的凍存管放入程序降溫盒或是保溫杯中，置于-80°C冰箱6小時以上或是過夜（或不需要程序降溫)。

• 將凍存管迅速移到液態(tài)氮氣相中保存。

• 凍存24小時后，建議檢測細胞存活率。

2. 細胞的復(fù)蘇，BI建議按以下方法操作：

• 將細胞凍存管由液態(tài)氮氣相中取出，置于室溫回溫，不用水浴溶解。此時可準(zhǔn)備新鮮培養(yǎng)基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。

• 在生物安全柜內(nèi)，直接以少量培養(yǎng)基反復(fù)沖融，使細胞團塊化凍。

• 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200×g~300×g，3分鐘離心收集細胞。

• 倒去上清液，重懸細胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

• 建議使用20%FBS復(fù)蘇細胞，等細胞長滿后，再降回原來血清比例。

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