Dan Root 和 Pete Claise

目標(biāo)
利用基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC^®系統(tǒng)并結(jié)合平行柱再生技術(shù)來提高樣品分析通量。

背景
典型的梯度LC分析包括以下常規(guī)步驟：
■ 取樣和進(jìn)樣
■ 梯度分離
■ 再生(沖洗色譜柱)
■ 重新平衡(使色譜柱返回初始條件)

這些依次進(jìn)行的操作將樣品和梯度通過特定容量的系統(tǒng)和色譜柱。執(zhí)行這些步驟所需的時(shí)間與分析所設(shè)置的流速有關(guān)。通過增加流速、使用較短的色譜柱(減小體積)和縮短重新平衡時(shí)間都能夠最大程度減少總分析時(shí)間。但是，這些參數(shù)的可調(diào)整范圍有限，尤其是后兩項(xiàng)參數(shù)，當(dāng)其到達(dá)一定程度時(shí)可能會(huì)影響色譜性能。平行柱再生為縮短總分析時(shí)間提供了另外一種途徑

實(shí)驗(yàn)室始終面臨著在更短的時(shí)間內(nèi)分析更多樣品的挑戰(zhàn)，如今終于有一款工具可以實(shí)現(xiàn)在確保高質(zhì)量色譜結(jié)果的同時(shí)輕松提高樣品通量的目標(biāo)—基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)。

在平行柱再生技術(shù)中，樣品分析在兩根具有相同流路的相同色譜柱之間交替進(jìn)行。在一根色譜柱上將樣品進(jìn)樣、分離和再生，與此同時(shí)，將另一根色譜柱進(jìn)行重新平衡，從而實(shí)現(xiàn)在給定的時(shí)間內(nèi)分析更多樣品。該方法在時(shí)間方面的優(yōu)勢(shì)如圖1所示。

解決方案
基于2D技術(shù)的AQUITY UPLC系統(tǒng)由兩個(gè)二元溶劑管理器(BSM)組成，一個(gè)是采用流通針式設(shè)計(jì)的樣品管理器，另一個(gè)則是配備兩個(gè)六通二位閥的色譜柱管理器。當(dāng)配置平行柱再生時(shí)，兩個(gè)泵的BSM必須相同。此配置的管路連接示意圖見圖2。在該配置中，α泵運(yùn)行分析梯度，而β泵對(duì)色譜柱進(jìn)行再生。

利用標(biāo)準(zhǔn)模式的UPLC對(duì)血漿中苯二氮卓類藥物阿普唑侖的UPLC生物分析方法進(jìn)行分析，并與基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)的平行柱再生模式相比較。優(yōu)化分離條件，以便在盡可能短的運(yùn)行時(shí)間內(nèi)有效地消除目標(biāo)分析物中與血漿蛋白沉淀相關(guān)的基質(zhì)效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)中采用了相同批號(hào)的相同色譜柱，MRM結(jié)果表明在各種條件下所得的色譜結(jié)果相似，如圖3a所示。

在無需對(duì)儀器方法作出任何調(diào)整的情況下，標(biāo)準(zhǔn)模式運(yùn)行所需的5.5 min進(jìn)樣間循環(huán)時(shí)間輕松縮短為4.1 min。外推到24 h進(jìn)行對(duì)比，在平行柱模式下使用本方法時(shí)增加了30%的樣品分析量，如圖3b所示。該方法中實(shí)際增加的通量是方法平衡時(shí)間與下次樣品進(jìn)樣和分析發(fā)生重疊的結(jié)果。但是，節(jié)省的時(shí)間量將取決于分析方法中可能的重疊程度。

總結(jié)
基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)結(jié)合平行柱再生技術(shù)為增加樣品通量提供了一種簡(jiǎn)單的工具，同時(shí)還可確保高質(zhì)量的色譜結(jié)果。利用這種方式，無需對(duì)分析方法的色譜參數(shù)作任何更改，即可實(shí)現(xiàn)性能的改善。基于2D技術(shù)的ACQUITY UPLC系統(tǒng)可通過靈活的配置滿足廣泛的應(yīng)用需求，以應(yīng)對(duì)科學(xué)及商業(yè)領(lǐng)域的各種挑戰(zhàn)。