〔摘　要〕 　目的　探討大黃酚對小鼠抗衰老的作用。

方法　采用避暗實驗,觀察大黃酚對學習記憶的影響;通過常壓耐缺氧、斷頭耐缺氧、亞硝酸鈉中毒造成的缺氧以及負重游泳實驗,觀察大黃酚對小鼠缺氧及耐力的影響;以AlCl3造成急性衰老小鼠模型,觀察大黃酚對小鼠血中超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響。

結(jié)果　大黃酚能明顯改善記憶障礙、提高小鼠耐力、并且能明顯提高急性衰老小鼠血中SOD活性。

結(jié)論 　大黃酚具有一定的抗衰老作用。

〔關(guān)鍵詞〕 　大黃酚，抗衰老，學習記憶，耐力，超氧化物歧化酶

　 據(jù)報道,大黃有抗衰老作用 ,而大黃中有效成分之一的大黃酚 ( chrys ophanol, Chry)是否具有抗衰老作用國內(nèi)外報道極少。我們在以前的研究中發(fā)現(xiàn)Chry能抑制肝、腦的脂質(zhì)過氧化反應,減少丙二醛(MDA)的含量,因此,我們用學習記憶、耐力以及老化相關(guān)酶試驗來進一步探討 Chry的抗衰老作用。

1　 資料與方法

1.1　 動物 　 昆明種小鼠 , 8～10 w,雌雄兼用。

1.2　 藥品和試劑 　Chry(中國藥品生物制品檢定所,實驗前用溶劑配成所需濃度)。溶劑 (N,N2 二甲基甲酰胺∶吐溫280∶ 生理鹽水=1∶1∶8)。氧化物歧化酶(SOD)測試盒。

1.3　儀器 　S BA2 2程控避暗箱,生物信號采集系統(tǒng)。

1.4　 方法

1.4.1　 大黃酚對學習記憶的影響 　 采用避暗法。

1.4.1.1　 對東莨菪堿(scopolamine,scop)所致記憶獲得障礙的影響 　

雌性小鼠55只,隨機分5組,體重(24±2)g。訓練前15min,生理鹽水(NS)對照組腹腔注射(ip)NS011ml/10g,scop模型組及Chry+scop組ip scop3 mg/kg。并于訓練前5min,NS組和scop組側(cè)腦室注射(icv)溶劑對照液5μl,Chry+scop組分別icv100、10、1μg/ml的Chry 5μl,采用避暗箱訓練3 min,24 h后測驗記憶成績,記錄每只鼠進入暗室的潛伏期和3 min內(nèi)錯誤次數(shù)。

1.4.1.2　 對亞硝酸鈉所致記憶鞏固障礙的影響 　 雄性小鼠50只,隨機分成5組,體重(25 ±3) g。小鼠采用避暗箱先訓練3min后,NS對照組立即皮下注射(sc)NS 011ml/10 g,亞硝酸鈉(NaNO2)模型組及Chry + NaNO2 組 ,立即 sc NaNO2 125 mg/kg,并且 NS組和亞硝酸鈉模型組分別 icv溶劑對照液 5μl,Chry + NaNO2組分別 icv 100、 10、 1μg/ml的 Chry 5μl, 24 h后測驗記憶成績 ,記錄每只鼠進入暗室的潛伏期和 3 min內(nèi)錯誤次數(shù)。

1.4.1.3　 對乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙的影響 　雄性小鼠60只,隨機分成5組,體重(21±3) g。測驗前15 min,NS對照組灌胃(ig)NS 011 ml /10 g,乙醇模型組及Chry+乙醇組ig 30%乙醇011ml/10g。每組小鼠采用避暗箱先訓練3min,24h后進行測驗。并于測驗前5min, NS組和乙醇模型組icv溶劑5μl,Chry+乙醇組分別icv100, 10, 1μg/ml的 Chry 5μl,記錄每只鼠進入暗室的潛伏期和3 min內(nèi)錯誤次數(shù)。

1.4.2　 大黃酚對小鼠耐缺氧及耐力的影響

1.4.2.1　 對常壓耐缺氧的影響 　雌性小鼠56只,隨機分成4組,體重 (32±2) g。對照組icv溶劑對照液5μl,給藥組分別icv大黃酚 (100, 10, 1μg/ml) 5μl,注射后 5 min進行實驗。參照文獻方法〔3〕,取同組小鼠 2只,放在盛有30g鈉石灰的廣口瓶(250 ml)中,用凡士林密封,以5s內(nèi)不再張口呼吸為觀察指標。

1141212　 對斷頭耐缺氧的影響 　雌性小鼠 48只 ,隨機分成4組,體重(27±2)g。分組和給藥方法同上。參照文獻方法〔3〕,迅速斷頭,觀察小鼠張口呼吸時間 ,以5s內(nèi)不再張口呼吸為觀察指標。

1.4.2.3　 對亞硝酸鈉中毒缺氧的影響 　雌性小鼠 40只,隨機分成4組,體重(22±3) g。分組和給藥方法同上。參照文獻方法〔3〕,各組立即ip NaNO2 240 mg/kg,并開始記錄,以 5 s內(nèi)不再張口呼吸為觀察指標。

1.4.2.4　 對負重游泳的影響 　雌性小鼠56只,隨機分成4組,體重(32±1) g。分組和給藥方法同上。參照文獻方法〔3〕,記錄小鼠的體重,給小鼠負重 10%體重的物體 ,系在其尾根部,將其放入水桶中游泳,水桶直徑為30cm,水深20cm,水溫27～28℃,自投入水內(nèi)開始 ,記錄小鼠沉入水底死亡的時間。

1.4.3　 大黃酚對小鼠老化相關(guān)酶的影響 　雄性小鼠50只,隨機分成5組,體重 (18±2) g。NS對照組每天 sc NS 011 ml /10 g,AlCl3模型組及大黃酚+AlCl3組小鼠每天scAlCl370mg/kg,連續(xù)7d。參照文獻方法〔4〕,同時NS組AlCl 3 70 mg/kgip, Chry+AlCl3組分別i p大黃酚10,1,011mg/kg連續(xù)18d,進行酶學實驗。將小鼠的頸動脈切開取血,置于1ml的抗凝管(用2 U/μl肝素50μl濕潤管壁,低于80℃烤干)中。4000 r/min,離心10min后取血漿10μl,采用羥胺法〔3〕以SOD試劑盒測定。規(guī)定每 ml反應液中 S OD抑制亞硝酸鹽達 50%時所對應的SOD量為一個單位。

1.5　 統(tǒng)計學處理 　用 I NST AT2 2統(tǒng)計軟件進行處理 ,以 x ±s表示。數(shù)據(jù)資料用 t檢驗,錯誤百分率用χ 2檢驗。

2　 結(jié) 　 果

在本實驗中,Chry各劑量組均能明顯改善Scop所致的記憶獲得障礙、亞硝酸鈉所致的記憶鞏固障礙和乙醇所致的記憶再現(xiàn)障礙,使小鼠進入暗室的潛伏期延長,錯誤次數(shù)減少,動物錯誤反應率降低,與模型組比較有顯著性差異。在耐力實驗中, Chry可顯著延長小鼠耐常壓缺氧時間、斷頭造成的急性缺氧時間、由NaNO2中毒所致缺氧的時間,并可顯著延長小鼠負重游泳時間 ,與溶劑組比較有顯著性差異,說明Chry能提高小鼠耐力,具有抗疲勞的作用。在老化相關(guān)酶實驗中,AlCl3可明顯降低小鼠血漿SOD活性(對照組為416±31,模型組為300±49,P< 01001) ,而 Chry各劑量組均可明顯提高AlCl3所致急性衰老小鼠血漿 S OD活性 (Chry 10, 1, 011mg/kgSOD分別為366±72, 366±64, 388±67,P值分別為 P<0105, P< 0105, P< 0101)。

3　 討 　 論

學習記憶減退是衰老的重要指標之一。本實驗結(jié)果表明,大黃酚(Chry)能明顯改善東莨菪堿(Scop)所致的記憶獲得障礙、NaNO2所致的記憶鞏固障礙和30%乙醇所致記憶再現(xiàn)障礙,使小鼠進入暗室的潛伏期延長、錯誤次數(shù)減少、動物錯誤反應率降低 ,具有改善學習記憶的功能,機制有待進一步研究。衰老過程中,動物自身退行性變化逐漸增加,對環(huán)境的適應能力減弱。在本實驗中給予小鼠以惡性刺激,即缺氧和負荷實驗來觀察小鼠對環(huán)境變化的適應能力。結(jié)果表明,Chry具有明顯的抗缺氧和提高小鼠耐力、抗疲勞的能力,可能與其擴血管作用有關(guān)。隨著增齡,人體內(nèi)SOD活性下降,進而引起神經(jīng)元細胞膜損傷,導致腦記憶功能下降。本實驗用鋁誘導急性衰老模型,是以鋁中毒假說為基礎的。結(jié)果顯示,AlCl3模型組可明顯降低小鼠血中SOD活性;Chry能明顯提高血中SOD活性,清除過多的自由基,使腦神經(jīng)元細胞膜免受過氧化脂質(zhì)的損傷,從而起到抗衰老作用。