Goldview I核酸染料——EB替代品的原理及使用方法

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GoldView(GV)是一種可代替溴化乙錠（EB）的新型核酸染料，其靈敏度與EB相當(dāng)，使用方法與之完全相同，在100ml瓊脂糖膠溶液中加入5μl GoldView即可。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現(xiàn)綠色熒光，也可用于染RNA。由于未發(fā)現(xiàn)GoldView有致癌作用，且靈敏度與EB相當(dāng)，將有可能逐漸取代EB而得以廣泛應(yīng)用。

　　概述

　　GoldView是一種可代替溴化乙錠（EB）的新型核酸染料，采用瓊脂糖電泳檢測(cè)DNA時(shí)，GoldView與核酸結(jié)合后能產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光信號(hào)，其靈敏度與EB相當(dāng)，使用方法與之完全相同。在紫外透射光下雙鏈DNA呈現(xiàn)綠色熒光，而且也可用于染RNA。

　　通過(guò)Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠睪丸精母細(xì)胞染色體畸變?cè)囼?yàn)，致突變性結(jié)果均為陰性；而溴化乙錠（EB）是一種強(qiáng)致癌劑。因此用Goldview代替EB不失為一種明智的選擇。

　　使用方法

　　1. 將100ml瓊脂糖凝膠溶液（濃度一般為0.8%~2%）在微波爐中融化。

　　2. 加入5μl GoldView，輕輕搖勻，避免產(chǎn)生氣泡。

　　3. 冷卻至不燙手時(shí)倒膠，待瓊脂糖凝膠完全凝固后上樣電泳。

　　4. 電泳完畢在紫外燈下觀察。若使用數(shù)碼相機(jī)照相記錄，則關(guān)閉相機(jī)的閃光燈，放在自動(dòng)檔即可；若使用凝膠成像系統(tǒng)照相，通過(guò)調(diào)節(jié)光圈、曝光時(shí)間，選擇合適的濾光片，可得到成像清晰、背景較低的照片。

　　注意事項(xiàng)

　　1. 膠厚度不宜超過(guò)0.5cm，膠太厚會(huì)影響檢測(cè)的靈敏度。

　　2. 加入GoldView的瓊脂糖凝膠反復(fù)融化可能會(huì)對(duì)核酸檢測(cè)的靈敏度產(chǎn)生一定影響，但不明顯。

　　3. 通過(guò)凝膠電泳回收DNA片段時(shí)，建議使用GoldView染色，在自然光下切割DNA條帶，避免紫外線與EB對(duì)目的DNA產(chǎn)生的損傷，可明顯提高克隆、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)錄等分子生物學(xué)下游操作的效率。

　　4. 雖然未發(fā)現(xiàn)GoldView有致癌作用，但對(duì)皮膚、眼睛會(huì)有一定的刺激，操作時(shí)應(yīng)戴上手套。

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