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原代貼壁細(xì)胞吉姆薩染色法

瀏覽次數(shù):3587 發(fā)布日期:2010-9-15  來源:www.pricells.com.cn

原代貼壁細(xì)胞吉姆薩染色法

染液制備:

1. 稱取0.5g吉姆薩粉和22ml甘油;

2. 取少量甘油與吉姆薩粉在研缽內(nèi)充分混合,研磨至無顆粒;

3. 將剩余的甘油倒入研缽,于56℃保溫2h;

4. 加入33ml純甲醇混勻,即為吉姆薩母液,將其保存于棕色試劑瓶?jī)?nèi);

5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen緩沖液和1份吉姆薩母液混合即得染色液;

 

貼壁細(xì)胞染色步驟:

1. 去除培養(yǎng)器皿內(nèi)的培養(yǎng)液,用平衡鹽溶液反復(fù)漂洗單層培養(yǎng)物2次;

2. 加入平衡鹽溶液,再逐滴加入等體積甲醇,邊加邊混合,靜置10min;

3. 將50%甲醇-BSS混合液丟棄,加入新鮮的甲醇液浸泡固定細(xì)胞10min,然后用甲醇漂洗細(xì)胞1次;

4. 將瓶?jī)?nèi)細(xì)胞干燥后儲(chǔ)存或直接染色;

5. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆薩染液,覆蓋細(xì)胞層,染色2min;

6. 移除染液,用自來水沖洗掉粉紅色背景后,再用去離子水沖洗細(xì)胞;

7. 用顯微鏡觀察單層潮濕細(xì)胞。若細(xì)胞已干,可重新使細(xì)胞潮濕后再觀察;

 

結(jié)果:

細(xì)胞核被染成紫紅色或紫藍(lán)色,而細(xì)胞質(zhì)則被染成淺紅色;

吉姆薩染色法注意事項(xiàng):

1. 染液宜現(xiàn)用現(xiàn)配,舊染液染色效果不佳。染液保存時(shí)間不宜超過48h;

2. 吉姆薩對(duì)pH極敏感,因此,緩沖液pH要準(zhǔn)確,否則染色效果不佳。如用染色缸染色時(shí),隨染色時(shí)間的延長(zhǎng),在染液表面常形成一層氧化膜(發(fā)亮)易附著在玻片上形成污穢,且不易除掉。因此在用染色缸染色,尤其用的不是現(xiàn)配者時(shí),染色前應(yīng)先用小片濾紙刮除液面的氧化層再進(jìn)行染色。染色完畢,應(yīng)把標(biāo)本浸入水中漂洗染液;

發(fā)布者:武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司
聯(lián)系電話:027-87490190
E-mail:service@pricells.com.cn

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