前言：
自然殺傷（NK）細胞是先天免疫系統的重要組成部分，其無需事先敏化即可識別并消滅惡性或病毒感染細胞。在前臨床研究中，NK細胞殺傷實驗用于評估NK細胞療法的效果。這些實驗通過將NK細胞與熒光標記的靶細胞共培養，測量靶細胞裂解程度以評估NK細胞活性。然而，傳統染料如Calcein-AM的快速泄漏影響了實驗的準確性。本研究采用綠色熒光染料CellTracker CMFDA及Celloger^® Pro自動活細胞成像系統，改善了檢測精度。
 
材料與方法：
靶細胞制備：

• 使用U-2OS細胞，分三種條件：
  • 穩定表達EGFP標記的H2B；
  • 使用Calcein-AM染色；
  • 使用CellTracker CMFDA染色。
• 各組細胞在無血清培養基中染色后，于48孔板中以3×10⁴密度接種，并與NK-92效應細胞按不同效應/靶（E:T）比（5:1、10:1、20:1）共培養。
• 通過4倍物鏡的 Celloger^® Pro 在24h內每間隔1h采集圖像，使用 Celloger^® 分析軟件對實驗結果進行分析，通過紅綠熒光強度比值以評估NK細胞毒性。

 
結果：

• 熒光標記細胞： GFP-H2B靶細胞的實驗表明，隨著E:T比增加，紅熒光（死亡細胞）強度上升，綠熒光（活細胞）下降，且細胞聚集增多。
• 染料比較： CellTracker CMFDA在染料保持性及長時間追蹤方面優于Calcein-AM。CMFDA熒光信號穩定超過12小時，避免了Calcein-AM的快速泄漏引起的誤差。
• 優點總結： CellTracker CMFDA具有更高靈活性，適合快速高效的實驗設置，而GFP表達細胞系雖精確但制備耗時且成本高。

 
亮點總結
1️⃣ 創新監測方法：使用Celloger^® Pro自動化活細胞成像系統，結合優化染色試劑，實現更精準的NK細胞毒性分析。
2️⃣ 穩定性對比：實驗顯示CellTracker CMFDA染劑相較傳統Calcein-AM染劑，具有更高的細胞內保留率和更低的漏染，確保實驗數據的可靠性。
3️⃣ 實時觀察：Celloger^® Pro可直接觀測細胞形態變化及死亡過程，為細胞毒性研究提供更深層次的洞察。

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• 熒光和明場鏡頭

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Celloger^® Pro為用戶提供可更換的物鏡，為研究人員的不同需求提供靈活性。有2X，4X和10X的物鏡供選擇，用戶可以自由切換。

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