利用Symphony X縮短合成（65-74）ACP肽循環(huán)時間和溶劑消耗的方案介紹
1 介紹
新的優(yōu)化的快速肽合成方法，結(jié)合平行多肽合成儀器，可以高通量地生產(chǎn)肽庫。
使用 Symphony X 全自動高通量多肽合成儀探索合成方案的優(yōu)化，通過在偶聯(lián)步驟后去除 DMF 洗滌來減少循環(huán)時間并減少溶劑消耗和廢液產(chǎn)生。
2 方法和分析
使用 Fmoc-Gly-Wang 樹脂（取代度 0.32 mmol/g）在 Symphony X 多肽合成儀上以 20 μmol 的規(guī)模合成 65-74ACP 肽。在室溫下，用 20% Pip（DMF 中）進(jìn)行兩次脫保護(hù)，每次 2.5 分鐘。洗滌：DMF 6 x 30 秒。在室溫下，以 100 mM AA（10 當(dāng)量）、100 mM HCTU（10 當(dāng)量）和 200 mM NMM（20 當(dāng)量）的最終濃度進(jìn)行偶聯(lián)，每次 2 x 5 分鐘。使用的裂解混合物是 TFA/Anisole/H2O/EDT，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行 2 小時。對每個肽進(jìn)行三次重復(fù).
將所得粗肽溶解于水中，使用 Varian ProStar HPLC 進(jìn)行分析，使用 C18、180 Å、5 um、250 x 4.6 mm 柱（Agilent Polaris），流速為 1 mL/min，使用 5-95% B 梯度洗脫，其中緩沖液 A 為含 0.1% TFA的水，緩沖液 B 為含0.1% TFA的乙腈。檢測波長為 214 nm。質(zhì)譜分析在配備 C18、100 Å、2.6 um、50 x 2.1 mm 色譜柱 (Phenomenex Kinetex) 的 Shimadzu LCMS-2020 Single-Quad 質(zhì)譜儀上進(jìn)行，分析時間為 7 分鐘，流速為 1 mL/min，梯度為 5-50% B洗脫，其中緩沖液 A 為含 0.1% 甲酸的水，緩沖液 B 為含0.1% 甲酸的乙腈。
3 結(jié)果
通過減少偶聯(lián)后的清洗次數(shù)，優(yōu)化了 65-74ACP 的合成。消除偶聯(lián)后清洗可將循環(huán)時間從 2.8 分鐘縮短至 2.3 分鐘，并將溶劑消耗量從 55 毫升縮短至 41 毫升，而不會顯著影響最終肽的純度（表 1）
表 1 洗滌方案對肽純度、循環(huán)時間和溶劑消耗的影響。肽序列：VQAAIDYING
4 結(jié)論
利用Symphony X 全自動高通量多肽合成儀消除偶聯(lián)后清洗可帶來以下好處：
- 整體循環(huán)時間縮短 20%
- 整體溶劑消耗量減少 25%
- 純度幾乎保持不變
- 肽合成時間和成本整體改善
Symphony X 全自動高通量多肽合成儀
- 24個獨(dú)立反應(yīng)通道
- 支持原位活化和預(yù)活化
- 8個試劑瓶，40個氨基酸位置
- Single-ShotTM特殊氨基酸傳輸技術(shù)
- 內(nèi)置專利設(shè)計的PurePep Pathway流路系統(tǒng)
- 紅外加熱（選配，第一個通道）
- IntelliSynthTM UV監(jiān)測（選配，第一個通道）
- 肽預(yù)測軟件
- 遠(yuǎn)程郵件提醒
- 軟件設(shè)計符合21 CFR Part 11合規(guī)性
- 自動原位切肽
- 自動多肽純化
