介紹 Single-Shot^TM

特殊修飾的氨基酸、非天然氨基酸在各種肽合成應(yīng)用中發(fā)揮著重要作用。然而，這些修飾后的單體通常價(jià)格昂貴，其應(yīng)用則受到成本的限制。為解決這一挑戰(zhàn)。PurePep Chorus多肽合成儀引入了Single-Shot^TM功能,這一功能也是PTI公司的專利研發(fā)技術(shù)，以確保更有效地利用昂貴的單體。Single-Shot^TM功能設(shè)計(jì)使得在特定的偶聯(lián)步驟中可以將氨基酸瓶中的特殊氨基酸一次性全部傳遞到指定的反應(yīng)容器中，沒(méi)有溶劑的損失，最大化的提高試劑利用率。相比之下，其他自動(dòng)化多肽合成儀在液體傳輸過(guò)程中總會(huì)有一定量的試劑浪費(fèi)，這一點(diǎn)對(duì)于使用特殊氨基酸和昂貴試劑來(lái)說(shuō)是非常不友好的。在本實(shí)驗(yàn)中，Single-Shot^TM功能被用于合成以下磷酸肽：(1) 牛αS1-酪蛋白(70-79)：H-EIVPNSVEQK-NH2 和 (2) SIN1s315CP：H-CRRKGSQKVS-NH2。每個(gè)序列中的磷酸化絲氨酸如圖所示。
 

圖 1 磷酸化肽的結(jié)構(gòu)

方法
肽合成：使用PurePep Chorus多肽合成儀在40 μmol的規(guī)模上，采用Rink-amide-MBHA樹(shù)脂（0.47 mmol/g）。脫保護(hù)步驟中，使用20%哌啶二甲酰胺（DMF）溶液，每次15分鐘，共進(jìn)行2次。偶聯(lián)反應(yīng)使用200 mM氨基酸，AA與HCTU和NMM的比例為1:1:2，每次45分鐘，所有偶聯(lián)反應(yīng)均適用，除了磷酸絲氨酸，它的偶聯(lián)時(shí)間為1小時(shí)，進(jìn)行兩次。在線裂解：使用95:2:2:1 TFA/EDT/anisole/water溶液進(jìn)行裂解，持續(xù)2小時(shí)。每個(gè)序列中，200mM磷酸絲氨酸1mL儲(chǔ)存在Single-Shot容器中。

分析：多肽在Varian Pro-Star HPLC上，使用Varian Microsorb C-18柱（4.5 x 50 mm）進(jìn)行分析，采用水-乙腈-0.1% TFA緩沖體系，在60分鐘內(nèi)從5%到95%的乙腈梯度逐漸增加。檢測(cè)波長(zhǎng)為214 nm。

結(jié)果
結(jié)果顯示在圖2和圖3中。

圖 2 H-EIVPNpSVEQK-NH2的HPLC結(jié)果
 

圖 3 H-CRRKGpSQKVS-NH2的HPLC結(jié)果

結(jié)論
PurePep Chorus多肽合成儀能夠生產(chǎn)高質(zhì)量的粗品磷酸肽，同時(shí)避免了昂貴的磷酸化氨基酸的浪費(fèi)。

PurePep Chorus全自動(dòng)高通量多肽合成儀

• 自動(dòng)多肽純化可配置2、4或6個(gè)反應(yīng)容器
• 選配可控感應(yīng)加熱和振蕩混勻
• 選配實(shí)時(shí)紫外線監(jiān)測(cè)
• 內(nèi)置PurePep Pathway流路系統(tǒng)
• Single-Shot^TM液體傳輸技術(shù)
• 直觀的操作軟件
• 自動(dòng)原位切肽