MetaSPR技術(shù)在分子垂釣中的應(yīng)用
在生命科學(xué)的探索中，每一次分子的精準(zhǔn)“相遇”，不僅映射了生命內(nèi)在的復(fù)雜旋律，還潛藏了解讀疾病、促進(jìn)健康乃至革新治療手段的無(wú)限可能。想象一下，如果我們能夠設(shè)計(jì)出完美的“誘餌”，專(zhuān)門(mén)吸引并識(shí)別那些關(guān)鍵的靶標(biāo)分子，那將開(kāi)啟怎樣的科研奇跡？
精心策劃的分子“邂逅”
目前，Pull-Down技術(shù)作為分子垂釣的主流方法，卻因其操作復(fù)雜和非特異性高而受限。而一個(gè)理想的捕獲過(guò)程應(yīng)該確保目標(biāo)分子在固定狀態(tài)下的活性結(jié)合，最小化非特異吸附，實(shí)現(xiàn)高效的洗脫以降低損失，并能精確地鑒定分子間的相互作用。針對(duì)于此，MetaSPR技術(shù)創(chuàng)新性地通過(guò)檢測(cè)特定波長(zhǎng)下透射光的光密度值變化，實(shí)時(shí)捕捉并記錄分子相互作用的動(dòng)態(tài)過(guò)程，極大地提升分析速度與精確性，成為驅(qū)動(dòng)領(lǐng)域前進(jìn)的關(guān)鍵技術(shù)。
01 分子垂釣實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
02 MetaSPR分子垂釣技術(shù)路線
03 分子垂釣實(shí)驗(yàn)流程
藥物或蛋白表位垂釣與鑒定
TNF-α即腫瘤壞死因子α，是TNF超家族的配體。它是一種多效細(xì)胞分子并介導(dǎo)細(xì)菌感染的免疫應(yīng)答，在多種免疫相關(guān)疾病中扮演著重要的角色。
近年來(lái)開(kāi)發(fā)抗TNF-α的抗體藥物在關(guān)節(jié)炎、銀屑病、炎癥性腸病和其他一些炎癥性疾病中取得了不同程度的成功，使其成為目前市場(chǎng)價(jià)值較高的生物藥靶點(diǎn)之一，相關(guān)的原研生物藥近十年來(lái)的銷(xiāo)售總額持續(xù)增長(zhǎng)。利用MetaSPR技術(shù)進(jìn)行抗體藥物表位垂釣與鑒定對(duì)于加速藥物開(kāi)發(fā)進(jìn)程和深入研究抗體藥物的作用機(jī)制來(lái)說(shuō)，是至關(guān)重要的。
抗體藥物表位垂釣與鑒定
- MetaSPR技術(shù)鑒定目標(biāo)抗體與TNFa結(jié)合且親和力較高
- 將TNFa蛋白消化成多肽
- 氨基傳感器固定抗體，抓取多肽片段并洗脫進(jìn)行質(zhì)譜鑒定；鑒定出與靶標(biāo)抗體結(jié)合的多肽片段為—SDKPVAHVVANP—
- 合成多肽序列并與抗體再次進(jìn)行MetaSPR技術(shù)分析，確認(rèn)多肽與抗體親和力為4.90E-10M
中藥小分子垂釣
TMBIM6是一種含有BAX抑制基序跨膜蛋白，在細(xì)胞凋亡、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)以及線粒體穩(wěn)態(tài)等方面有重要作用。研究表明TMBIM6通過(guò)組裝特定的蛋白質(zhì)復(fù)合體，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活和增殖，在多種癌癥類(lèi)型中過(guò)表達(dá)。TMBIM6下調(diào)可抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移能力。
中藥小分子垂釣與鑒定
- 將TMBIM6蛋白固定在MetaSPR芯片
- 流通千金子中藥粗提物并與TMBIM6蛋白進(jìn)行結(jié)合、洗脫
- 將收集的洗脫液進(jìn)行質(zhì)譜分析鑒定，初步鎖定候選化合物13-OD
- 分離或合成13-OD并與TMBIM6蛋白進(jìn)行MetaSPR確認(rèn)及體內(nèi)外活性評(píng)價(jià)
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