隨著科學的進步，由于傳統(tǒng)細胞體外培養(yǎng)的局限性，類器官細胞培養(yǎng)在臨床研究中的應用越來越多，NEST整合公司多方資源，致力于為客戶提供類器官培養(yǎng)最前沿的產(chǎn)品管線和技術服務。
 

其中GelNest™基質膠在體外3D培養(yǎng)中發(fā)揮著至關重要的作用。

GelNest™基質膠主要是模擬體內細胞基底膜的結構、組成、物理特性和功能，可以有效促進正常細胞、轉染細胞、貼壁生長的上皮細胞等細胞的粘附和分化，包括神經(jīng)細胞，肝細胞，動物上皮細朐及黑素瘤等，能夠提高細胞培養(yǎng)的成功率和效果。同時在類器官培養(yǎng)、類器官藥物敏感實驗以及Transwell細胞體外侵襲實驗都發(fā)揮著重要的作用。

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GelNest™基質膠成分解讀

1. GelNest™基質膠中含有DNA或RNA嗎？
含有，GelNest™基質膠沒有經(jīng)過DNase或RNase消化處理，可能會含有痕量的DNA、RNA。此外，因為基質膠中含有痕量的RNA，進行RNA分析時，應設一個GelNest™基質膠(不接種細胞的對照組)。

2.  GelNest™基質膠中含有血管內皮生長因子(VEGF)和金屬蛋白酶(MMPs)嗎？
標準型的GelNest™基質膠中含有5.0-7.5ng/ml的血管內皮生長因子(VEGF)；

低生長因子的GelNest™基質膠中的VEGF含量為1.0-1.5ng/mL；

另外，GelNest™基質膠中可能還含有小鼠腫瘤細胞來源的痕量的金屬蛋白酶(MMPs)。

3. GelNest™基質膠中含有LDEV嗎？
不含。GelNest™基質膠經(jīng)免疫方法及PCR方法檢測，并不含有乳酸脫氫酶增高病毒(LDEV)或者乳酸脫氫酶增生病毒(LDHV)，同時也未發(fā)現(xiàn)細菌、真菌和支原體。

4.  GelNest™基質膠含中有尿素嗎？
不含。

5.  GelNest™基質膠中使用的什么緩沖液？
低糖DMEM (1g/L)，其中包含50µg/mL慶大霉素。

6.  GelNest™基質膠中含有纖維連接蛋白嗎？
經(jīng)Western Blot檢測，在GelNest™基質膠中發(fā)現(xiàn)了微量的纖維連接蛋白。

7.  GelNest™基質膠中含有玻璃體結合蛋白嗎？
某些組織中可能含有微量的血液，因此GelNest™基質膠中可能會有痕量的玻璃體結合蛋白。

8.  GelNest™基質膠中還有什么別的物質？
GelNest™基質膠中還可能含有濃度小于0.02%的三氯甲烷，以及腫瘤細胞的產(chǎn)生的其它未知蛋白或分子。

近20年，基質膠被廣泛的應用于細胞分化、血管形成和腫瘤生長有關的研究，建立了許多的細胞分化模型、血管生成和腫瘤惡性程度相關檢測方法。當細胞分化后，可以將其移植回動物，替代病變或缺損的組織。未來基質膠在體新型類器官模型構建、體外腫瘤細胞生物學特性研究及其他細胞方面的應用也一定會越來越廣泛。GelNest™基質膠特別是在組織工程、細胞培養(yǎng)和研究等方面，可被用于類器官培養(yǎng)、干細胞分化、血管生成、遷移或侵襲和體內腫瘤發(fā)生等研究。

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GelNest™基質膠應用指導

1. 什么情況下需要使用不含酚紅的GelNest™基質膠？
對于涉及顏色檢測的實驗，推薦使用不含酚紅的GelNest™基質膠，如使用熒光染料對內皮細胞成管的定量；

對子宮內膜細胞培養(yǎng)必須使用不含酚紅的GelNest™基質膠。

不含酚紅的GelNest™基質膠也可以應用于一些體內應用研究。因酚紅與一些非甾體雌激素結構相似，有顯著的雌激素活性，在實驗動物體內可能具有干擾內分泌與荷爾蒙代謝的能力。此外，酚紅是一種潛在的內分泌干擾物，有可能會干擾實驗動物體內激素的自然產(chǎn)生和代謝能力。

2. 高濃度GelNest™基質膠可以用于哪些實驗？
高濃度GelNest™基質膠可用于3D細胞培養(yǎng)、裸鼠體內成瘤實驗等體內應用研究。高濃度GelNest™基質膠的蛋白濃度高，和腫瘤細胞一起皮下注射到小鼠體內后保持其完整性并保持原位，以便進行原位分析或未來腫瘤的取樣。

3. 哪些情況下應該選用薄膠法/厚膠法？3D細胞培養(yǎng)有哪些應用？
薄膠法主要用于細胞貼壁和增殖，如原代細胞培養(yǎng)僅需要一層薄薄的蛋白層輔助而非蛋白基質；

厚膠法主要用于3D細胞培養(yǎng)，成環(huán)試驗，如大鼠主動脈組織分化為毛細管樣結構，以及進行細胞侵襲實驗等。

3D細胞培養(yǎng)實驗，主要是用于研究細胞與細胞間的相互作用以及復雜結構等。

4. GelNest™基質膠可以用于誘導ES/iPS細胞分化的研究嗎？
可以，實驗表明GelNest™基質膠可以用于ES/iPS細胞的分化研究，建議使用干細胞專用的GelNest™基質膠。

5. 如何從GelNest™基質膠中收獲細胞？
推薦使用中性蛋白酶，如分散酶來收獲培養(yǎng)在GelNest™基質膠中的細胞。

中性蛋白酶相比胰蛋白酶、膠原蛋白酶或其它蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或分裂細胞表面蛋白。對于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或生物檢測的細胞，使用中性蛋白酶不會產(chǎn)生損傷，此外中性蛋白酶也可以用于組織的分離。

也可使用相應的細胞復蘇溶液進行代謝實驗和RNA回收實驗，建議在4℃使用細胞復蘇溶液進行非酶反應的細胞收獲。
其它方法：降低溫度至4-6℃使基質膠解聚，這需要一定的時間并且僅適合一部分應用；或者離心以破壞基質膠結構。

6. 使用GelNest™基質膠培養(yǎng)的細胞，如果需要進行切片或者免疫組織化學及免疫熒光檢驗，該怎樣固定呢？如何避免解聚？
可以使用2-4%多聚甲醛進行固定，如2-4%多聚甲醛配制在PBS中，室溫固定20分鐘。某些情況下，在固定后可能出現(xiàn)解聚的情況，可以加入1%戊二醛(戊二醛作為固定劑，常用于電鏡檢測)。

如果需要進行免疫熒光檢驗，加入戊二醛后，會出現(xiàn)明顯的背景熒光。為了解決這一問題，建議操作中在固定之后，使用NaBH4進行淬滅。NaBH4極易起泡，進行該步驟時，必須在水平操作臺上小心操作，避免晃動，盡量減少氣泡的形成。另外，也可以嘗試使用較低濃度(如0.1%到0.5%)的戊二醛進行固定，濃度越低，背景熒光信號越少。

7. 提取過程會引起層粘連蛋白變性嗎？
不會引起層粘連蛋白變性。

注：NEST提供的各種基質膠應用方案僅供參考，實際須根據(jù)實驗目的進行條件的優(yōu)化。

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GelNest™基質膠產(chǎn)品推薦