細(xì)胞培養(yǎng)是每個(gè)實(shí)驗(yàn)者都會(huì)使用的技術(shù)，但是細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中常受到許多不同來(lái)源的污染，如細(xì)菌、真菌、支原體和內(nèi)毒素污染等等，其中支原體污染最難發(fā)現(xiàn)和處理。綜合FDA、ATCC等機(jī)構(gòu)收集到的相關(guān)數(shù)據(jù)，世界各國(guó)細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。它們不僅與宿主競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)，還會(huì)掩蓋一些化合物毒性影響，因此細(xì)胞受到支原體污染后不但會(huì)抑制生長(zhǎng)和新陳代謝、改變DNA轉(zhuǎn)染效率，甚至最終會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、重復(fù)性及一致性，所以在實(shí)驗(yàn)中定期做好支原體預(yù)防、檢測(cè)和清除極為關(guān)鍵。

 

支原體污染細(xì)胞狀態(tài) 圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)

 

什么是支原體？

支原體模式圖 圖片引自David S. Goodsell手繪

 

支原體又稱(chēng)霉形體，是目前發(fā)現(xiàn)最微小、能夠自我復(fù)制且不具有細(xì)胞壁的原核生物，直徑大小僅為50-300nm，可通過(guò)濾菌器； 支原體可分為口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等多種類(lèi)型。

 

支原體污染對(duì)細(xì)胞的危害

●抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和新陳代謝；

●干擾核酸合成，染色體畸變；

●改變細(xì)胞膜抗原性，并可能改變DNA轉(zhuǎn)染效率；

●增加了對(duì)凋亡誘導(dǎo)物的敏感性；

●細(xì)胞死亡。
 

圖片引自Lonza官網(wǎng)

 

支原體污染來(lái)源

典型的支原體污染來(lái)源比較廣泛，通常包括以下幾種來(lái)源：

●未檢測(cè)細(xì)胞之間交叉污染；

●實(shí)驗(yàn)室環(huán)境或?qū)嶒?yàn)器材的直接污染；

●培養(yǎng)基或其他試劑污染；

●實(shí)驗(yàn)人員無(wú)菌操作不當(dāng)；

●制備細(xì)胞的組織或器官產(chǎn)生污染。

 

支原體污染的特性

一般細(xì)胞被支原體污染了幾個(gè)月都沒(méi)有被發(fā)現(xiàn)，支原體污染之所以很難檢測(cè)和預(yù)防，是因?yàn)槠渚哂蟹浅８叩碾[蔽性，具體如下：

●體積非常小，即使在支原體高濃度（>107 cfu/ml）下，顯微鏡下也不可見(jiàn)；

●相對(duì)于細(xì)菌污染，支原體污染不會(huì)引起渾濁或PH值改變等可見(jiàn)變化；

●大部分用于細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)的抗生素對(duì)支原體無(wú)效；

●常規(guī)的過(guò)濾也無(wú)法去除支原體。

 

如何預(yù)防支原體污染？

如何進(jìn)行安全的細(xì)胞培養(yǎng)并預(yù)防支原體的污染呢？?jī)?yōu)寧維為大家總結(jié)了十大技巧：

●穿戴適當(dāng)?shù)膫�(gè)人防護(hù)設(shè)備(手套、專(zhuān)用的干凈實(shí)驗(yàn)服、護(hù)目鏡)并消毒手套

●在細(xì)胞處理開(kāi)始前以及處理不同細(xì)胞系之間擦拭安全柜中的工作桌面

●避免在你的細(xì)胞上說(shuō)話(huà)或打噴嚏

●避免飛濺、溢出和氣溶膠

●為每個(gè)細(xì)胞系使用指定的培養(yǎng)基瓶

●定期清潔培養(yǎng)箱，包括水盤(pán)

●定期清空及清潔水浴設(shè)備

●細(xì)胞復(fù)蘇幾天后測(cè)試新細(xì)胞培養(yǎng)物的支原體污染

●隔離所有進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞培養(yǎng)物,直到它們經(jīng)過(guò)支原體檢測(cè)

●不要忘記：每2周進(jìn)行一次支原體的常規(guī)檢測(cè)

 

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