上周三，賽業(yè)生物腫瘤藥效部研發(fā)科學(xué)家朱金娥為大家主講「原位移植和轉(zhuǎn)移性腫瘤模型的構(gòu)建及應(yīng)用」線上課程，以下為本次直播常見問題匯總與解答。

FAQ:
1.如何用MC38小鼠建立結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型？
2.皮下成瘤實驗可以用普通小鼠做嗎？
3.原位移植腫瘤均一性的影響因素？
4.原位移植的成功率受什么影響？
5.原位移植和轉(zhuǎn)移性腫瘤模型的相關(guān)應(yīng)用場景？
6.可以介紹一下食管癌相關(guān)的原位癌嗎？
 

Q.如何用MC38小鼠建立結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型？
肝轉(zhuǎn)移腫瘤轉(zhuǎn)移模型模擬臨床中腫瘤切除術(shù)后癌細(xì)胞回流入門靜脈至肝臟血道播散而發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的過程。

下面的案例是用脾臟注射的手術(shù)方法構(gòu)建的C57BL/6小鼠MC38-luc結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型。
 

MC38 -Luc小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞脾臟注射的肝轉(zhuǎn)移腫瘤轉(zhuǎn)移模型

1.細(xì)胞接種量及稀釋：每只C57BL/6小鼠注射50μL含有1×10⁶個MC38 -Luc細(xì)胞的細(xì)胞懸液。

2.脾臟器官較薄，需沿著脾臟平行進(jìn)針，防止針口戳穿脾臟，脾臟中血管豐富，注射后需多按壓一段時間，防止血液外滲造成小鼠大量失血而死亡，或者注射到脾臟的腫瘤細(xì)胞外滲。注射結(jié)束后，結(jié)扎脾臟血管，最后摘除脾臟。

Q.皮下成瘤實驗可以用普通小鼠做嗎？
A .需要根據(jù)腫瘤源來選取小鼠，人源的腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織塊都需要用免疫缺陷小鼠進(jìn)行皮下移植模型構(gòu)建。鼠源細(xì)胞需要用相同背景鼠進(jìn)行模型構(gòu)建。

Q.原位移植腫瘤均一性的影響因素？
A .有以下幾個影響因素：細(xì)胞活性，細(xì)胞懸液均一度，注射體積的均一性，熒光信號均一性。

Q.原位移植的成功率受什么影響？
A .影響因素：麻醉風(fēng)險，位點(diǎn)手術(shù)風(fēng)險，技術(shù)能力，人工誤差，細(xì)胞特性等不同程度地影響原位移植的成功率。

Q.原位移植和轉(zhuǎn)移性腫瘤模型的相關(guān)應(yīng)用場景？
A.
1.研究腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移的機(jī)制。
2.篩選和評價抗腫瘤藥物的藥效。

Q.可以介紹一下食管癌相關(guān)的原位癌嗎？

Kyse150-luc人食管癌細(xì)胞下食道食管癌原位模型:
1. 細(xì)胞接種量及稀釋：每只C-NKG小鼠注射10μL含有0.5×10⁶個Kyse150-luc細(xì)胞的細(xì)胞懸液（用PBS和基質(zhì)膠混合的重懸液） 。

2. 接種在腹腔胃連接處的下食道漿膜層內(nèi)接種細(xì)胞。

3. 下食道漿膜層在肌肉作用下容易將未凝固的細(xì)胞團(tuán)液體擠出漿膜層滑進(jìn)腹腔，需要特殊用血管夾夾住食道，等待基質(zhì)膠凝固。

4. 建模成功率在80%。需要增加富余量20%-30%左右。

5. 此次建模使用C-NKG小鼠，可以使用缺陷小鼠類型： BALB/C nude；NOD/SCID；C-NKG。