BMG酶標(biāo)儀使用教程系列：如何優(yōu)化微孔板讀板機(jī)的增益設(shè)置

瀏覽次數(shù)：2418　發(fā)布日期：2023-8-25　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

你知道嗎？
增益設(shè)置是影響微孔板讀數(shù)機(jī)測量范圍的主要參數(shù)，即讀板機(jī)可以量化的最亮和最暗強(qiáng)度之間的比率。

你知道嗎？
增益設(shè)置具有人為設(shè)置的范圍。不同制造商的讀板機(jī)之間的這個范圍不同，這妨礙了測量值的直接比較。
然而，最大增益總是代表最高可能的信號放大。

吸光度、熒光和發(fā)光是基于微孔板的測定中最常用的三種檢測方法。與吸光度不同，熒光和發(fā)光不是絕對測量，而是取決于一個稱為“增益”的人工參數(shù)。

但增益設(shè)置是什么？它究竟如何影響你的測量？簡單地說，增益設(shè)置調(diào)節(jié)微孔板讀板機(jī)的測量范圍。這是一個定義微孔板讀板機(jī)檢測系統(tǒng)對入射光信號放大的因素。

圖1：微孔板讀板機(jī)的動態(tài)范圍

高增益設(shè)置提供了大的光信號放大，適用于產(chǎn)生弱信號的樣本。相反，低增益設(shè)置放大的樣本信號較少，適用于產(chǎn)生非常強(qiáng)的光信號的樣本。因此，為所測試出樣本選擇適當(dāng)?shù)脑鲆嬖O(shè)置對于獲得最佳結(jié)果至關(guān)重要。

圖2：增益設(shè)置對標(biāo)準(zhǔn)曲線的影響

在該案例中，在不同的增益設(shè)置下測量熒光基團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)曲線（1pM至100nM）。通過微孔板讀板機(jī)自動確定的最佳增益為589。增益設(shè)置高于最佳值589（比如增益700和900的曲線）導(dǎo)致檢測器在高樣品濃度下過飽和。如果出現(xiàn)過飽和，數(shù)據(jù)點(diǎn)將被記錄并顯示為可能的最高值（本讀板機(jī)是260000）。雖然低于最佳值589的增益設(shè)置（比如增益500和增益550的曲線）解析了標(biāo)準(zhǔn)曲線的所有數(shù)據(jù)點(diǎn)，但較低標(biāo)準(zhǔn)樣品和空白樣品之間的區(qū)分越來越困難。

不適當(dāng)?shù)脑鲆嬖O(shè)置將對數(shù)據(jù)質(zhì)量、分析窗口和靈敏度產(chǎn)生負(fù)面影響。如果用高增益測量強(qiáng)信號的樣本，這可能導(dǎo)致檢測器飽和導(dǎo)致數(shù)據(jù)不可用（圖2）。相反，如果用低增益檢測微弱信號，它們可能與背景噪聲無法區(qū)分（圖3A）。如果您想比較多個測試的數(shù)據(jù)，建議在保持相同實(shí)驗條件的同時，對每次測量使用相同的增益設(shè)置。

你知道嗎？
通過對全板進(jìn)行增益調(diào)整，微孔板讀板機(jī)識別出定義的板布局中產(chǎn)生最強(qiáng)光信號的孔，并相應(yīng)地調(diào)整增益設(shè)置。

圖3：增益設(shè)置對信號強(qiáng)度（A）和信噪比（B）的影響

增益從最佳值（增益589）設(shè)置得越低，100nM熒光團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)的值（藍(lán)色柱；圖3A）將越接近空白樣品的值（橙色柱；圖3A）。相反，當(dāng)使用高于最佳增益設(shè)置時，空白樣品的測量值接近過飽和值和100nM熒光團(tuán)標(biāo)準(zhǔn)樣品值。最佳增益設(shè)置提供了最佳的信噪比，這是數(shù)據(jù)質(zhì)量的一個重要指標(biāo)。當(dāng)遠(yuǎn)離最佳增益時，該比率相應(yīng)地減�。▓D3B）。

你知道嗎？
VANTAstar®和CLARIOstar®Plus讀板機(jī)上的增強(qiáng)動態(tài)范圍（EDR）功能可用于在整個測量過程中連續(xù)自動調(diào)整增益設(shè)置。

如何調(diào)整BMG LABTECH讀板機(jī)的增益設(shè)置？

BMG LABTECH讀板機(jī)的增益設(shè)置可以在選擇測試程序后，即測量開始前進(jìn)行調(diào)整。只需選擇一個樣本孔（或多個孔）進(jìn)行增益調(diào)整，選擇固定范圍（增益），然后單擊“開始調(diào)整”按鈕。

一般來說，增益調(diào)整應(yīng)在預(yù)期產(chǎn)生最強(qiáng)光信號的樣本孔上以90%的目標(biāo)值執(zhí)行。通過這種方式，可以適當(dāng)?shù)赜涗浐兔枥L測量的所有數(shù)據(jù)點(diǎn)。然而，這并不總是可行的，因為在動力學(xué)測量中產(chǎn)生的光信號可能隨時間而變化。在這種情況下，建議將空白樣品的讀值的10%作為起點(diǎn)。測量的目標(biāo)值（請參閱“如何調(diào)整BMG讀板機(jī)的增益設(shè)置”）可以以1%的增量進(jìn)行調(diào)整，以微調(diào)記錄信號的強(qiáng)度。

由于當(dāng)使用低于最佳值的增益設(shè)置時，測試樣品的測量值與空白值變得越來越難以區(qū)分，因此測定的檢測限（LOD）相應(yīng)地受到影響并增大。在這個例子中，可以使用589的最佳增益設(shè)置來獲得3.9 pM的LOD，而將增益設(shè)置降低到300時已經(jīng)將LOD增加到481.3 pM。越低的增益設(shè)置會導(dǎo)致測量數(shù)據(jù)與線性度的進(jìn)一步偏差，低于300的增益值會導(dǎo)致靈敏度的進(jìn)一步降低，通常不建議使用。

結(jié)論
增益設(shè)置是為您的分析選擇最佳測量窗口的一個重要參數(shù)。如果設(shè)置正確，增益設(shè)置將增強(qiáng)信號與背景的比率以及測量靈敏度，并確保測試的所有數(shù)據(jù)點(diǎn)都被正確記錄。

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