多色熒光原位雜交技術(M-FISH)的基本原理及應用
熒光原位雜交技術(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)是根據(jù)核酸堿基互補配對原理，用半抗原標記DNA或者RNA探針與經(jīng)過變性的單鏈核酸序列互補配對，通過帶有熒光基團的抗體去識別半抗原進行檢測，或者用熒光基團對探針進行直接標記并與目標序列結合，利用熒光顯微鏡直接觀察目標序列在細胞核、染色體或切片組織中的分布情況。M-FISH則是在熒光原位雜交基礎上發(fā)展起來的新技術，它不僅具有FISH的優(yōu)點，而且克服了FISH的許多局限，其特點是可將多次繁瑣的FISH實驗和多種不同的基因定位在一次FISH實驗中完成。M-FISH能同時檢測多個基因，分辨復雜的染色體易位和微小缺失，區(qū)分間期細胞多倍體和超二倍體等。M-FISH用激發(fā)光譜和吸收光譜不同的熒光索按一定調色方法標記不同的探針，從而對不同靶DNA同時進行定位和分析，并能對不同探針在染色體上的位置進行排序。
探針熒光素顏色調配的方法有非調色法，混合調色法和比例調色法。這3種調色法中，比例調色法只需要幾種熒光素就可標記多種探針，因而更有發(fā)展?jié)摿ΑＨ旧w描繪、比較基因組雜交、光譜染色體自動核型分析、交叉核素色帶分析及多彩色原位啟動標記等技術都是在M-FISH的基礎上發(fā)展起來的。
與其他原位雜交技術相比，多色熒光原位雜交具有很多優(yōu)點，主要體現(xiàn)在：
①宜于多靶雜交，可對同一個細胞學制片進行多個探針雜交；
②通過在同一個核中顯示不同的顏色可一次性顯示全部的染色體數(shù)量或結構的變化；
③能檢測到傳統(tǒng)顯帶方法不易發(fā)現(xiàn)的亞纖維染色體畸變不僅能夠鑒定隱藏的易位和復雜的重拍，而且可以分析與腫瘤發(fā)生相關的重要標記染色體及其基因。
目前該項技術目前已廣泛應用于動植物基因組結構研究，染色體精細結構變異分析，病毒感染分析，微生態(tài)分析，腫瘤遺傳學和基因組進化研究等許多領域。
明美MFISH熒光原位雜交分析系統(tǒng) 就是一款專為熒光顯微圖像的捕捉和處理而開發(fā)的實用圖像軟件。它搭配不同波段光譜濾光片的熒光顯微鏡以及高靈敏度的相機可對多種探針信號進行檢測成像，還有區(qū)域自動曝光，自動著色，信號點增強，一鍵合成多色熒光通道圖像，自定義各種顏色的探針，多焦面信號景深疊加，多層圖像位置偏移較正等功能。
深圳禾正醫(yī)院的老師采用了明美的MFISH熒光原位雜交分析系統(tǒng)，檢測中用her2/cep17的比值來測定是否有此原癌基因擴增，當HER2／CEP17比值≥2.0時，為HER2陽性；此外老師還定制了雙通道熒光模塊，可以同時在目鏡下觀察到紅綠兩種顏色的信號點，大大提高科室的工作效率。
