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實驗室常見離心方法的示意圖與步驟介紹

瀏覽次數:12381 發布日期:2022-11-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負

細胞離心是常見細胞實驗中不可缺少的一步,它不僅可以使掛壁的樣品完全沉降到管底,也可以幫助確認細胞濃度,用于后續的如原代細胞培養、細胞傳代培養、單細胞測序等相關實驗。

對于不同的細胞/細胞器分離,其離心分離法各不相同,適合的場合也不盡相同。那么常見的細胞離心分離方法都有哪些呢?

01差速離心法
差速離心法是利用在離心力場中不同的粒子沉降系數的差別,通過逐漸提高離心力,使非均勻混合液內的不同大小、形狀的粒子分步沉淀的離心方法。主要用于實驗室樣品分離,例如分離細胞器線粒體、葉綠體、蛋白質和病毒等

分離步驟 第一步:設置較低的離心速度(相對離心力),先讓較大的顆粒沉降到管底,而混合液中小的顆粒仍然懸浮在上清液中。

第二步:收集沉淀,設置較高的離心速度(相對離心力)離心懸浮液,將較小的顆粒沉降,后續依此類推,最終可分離不同大小顆粒的。
 


圖一.差速離心示意圖

 

02密度梯度離心法
密度梯度離心法又稱為區帶離心法,可分為速率區帶離心法等密度離心法。

 1.速率區帶離心法
主要用于分離密度相近而大小不等的細胞或細胞器。離心管內先裝入蔗糖、甘油、CsCl、Percoll等密度梯度介質,樣品粒子的密度必須大于梯度液柱中任一點的密度,被分離的粒子在梯度液中沉降速度不同,離心時,混合樣品中不同的組分將在梯度液柱的不同位置分別形成各自的區帶,達到彼此分離的目的。
 

圖二.速率區帶離心示意圖


2.等密度離心法
適用于分離密度不等的顆粒。細胞或細胞器在連續梯度的介質中經足夠大離心力和足夠長時間則沉降或漂浮到與自身密度相等的介質處,并停留在那里達到平衡,從而將不同密度的細胞或細胞器分離。常用介質有Percoll,而CsCl、Cs2SO4和三碘甲酰葡萄糖胺經長時間離心后也可產生穩定的梯度。
 


圖三.密度梯度離心示意圖


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瑞沃德M1416R高速臺式冷凍離心機,不僅可以應用在細胞的密度梯度離心,還可應用在細胞沉淀,細胞的懸浮純化;病毒的沉淀及PEG沉淀,病毒的密度梯度離心;蛋白質、核酸分離;生物制品、化學高分子制品、納米材料純化處理;臨床的血液、體液、排泄物等的分離。應用廣泛,性能卓越。
 

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發布者:深圳市瑞沃德生命科技股份有限公司
聯系電話:400-966-9516
E-mail:rwd@rwdls.com

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