生物緩沖劑在生物化學(xué)研究中有著重要的意義，在免疫印跡、生物芯片及生物雜交等實(shí)驗(yàn)及體外診斷、生物醫(yī)藥等行業(yè)中的應(yīng)用非常廣泛。
 

生物緩沖劑系統(tǒng)包含幾十個(gè)品種。典型品種如注射級(jí)氨丁三醇、HEPES等。本文將介紹其中最常見(jiàn)的品種——注射級(jí)氨丁三醇緩沖劑的優(yōu)點(diǎn)及使用注意事項(xiàng)。

一、簡(jiǎn)介：

注射級(jí)氨丁三醇是一種廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥領(lǐng)域的緩沖鹽，全稱三（羥甲基）氨基甲烷，化學(xué)式C4H11NO3，白色結(jié)晶顆粒，CAS號(hào)：77-86-1，25°C下的pKa為8.06，常用于蛋白或核酸緩沖液，有效范圍通常是pH 7.0-9.2之間。
 

注射級(jí)氨丁三醇被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng)，注射級(jí)氨丁三醇也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一，其在電泳緩沖液中與甘氨酸構(gòu)成緩沖體系，穩(wěn)定電泳過(guò)程中的pH。此外Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物的中間物，注射級(jí)氨丁三醇也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。
 

常見(jiàn)的注射級(jí)氨丁三醇緩沖液有Tris-HCl緩沖液、Tris-磷酸鹽緩沖液以及多種衍生緩沖液，如TBS、TE等。

二、注射級(jí)氨丁三醇緩沖液優(yōu)點(diǎn)如下：

1. Tris堿的堿性較強(qiáng)，所以可以只用這一種緩沖體系配制pH范圍由酸性到堿性的大范圍pH值的緩沖液，應(yīng)用范圍廣；

2. Tris緩沖液對(duì)生物化學(xué)過(guò)程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀；

3. Tris在水中溶解度高，對(duì)很多酶的反應(yīng)是惰性的；

4. Tris緩沖能力高，在pH7.5-9.0之間有較強(qiáng)的緩沖能力；

5. Tris緩沖劑應(yīng)用廣泛，在生物化學(xué)、分子生物學(xué)、體外診斷、化妝品、涂料等領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

三、使用注射級(jí)氨丁三醇緩沖劑的注意事項(xiàng)：

1. Tris緩沖液的pH值受溫度影響大，△pKa／℃＝－0.031 ，例如：4℃時(shí)緩沖液的pH＝8.4，則37℃時(shí)的pH＝7.4，所以一定要在使用溫度下進(jìn)行配制，室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃～4℃。

2. Tris緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大，緩沖液稀釋十倍，pH值的變化大于0.1

3. Tris在一定程度上與各種分子反應(yīng)，包括RNA酶抑制劑，醛，酶，DNA以及常見(jiàn)金屬如Cr3+，F(xiàn)e3+，Ni2+，Co2+和Cu2+等，在有些系統(tǒng)中會(huì)起抑制作用，在配制過(guò)程中需考慮與其他組分之間的相互作用；

4. Tris緩沖液易吸收空氣中的CO2，配制的緩沖液要注意蓋嚴(yán)密封；

5. Tris緩沖液對(duì)某些pH電極發(fā)生一定的干擾作用，需使用與注射級(jí)氨丁三醇溶液具有兼容性的電極；

6. Tris緩沖液不適用于二喹啉甲酸（BCA）測(cè)定；

7. 吸入，攝入，皮膚吸收注射級(jí)氨丁三醇可造成傷害，操作時(shí)需戴好手套和護(hù)目鏡；

8. 作為蛋白緩沖液時(shí)，若后續(xù)工作需要質(zhì)譜，則不適宜用注射級(jí)氨丁三醇，最好換成其他質(zhì)譜儀可耐受的緩沖液。

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