實驗室的小師妹，天天一臉崇拜的的跟著師兄學實驗，“師兄，實時定量PCR曲線好完美啊”“師兄，Western Blot條帶好漂亮啊，都沒有雜帶”……，這樣下去，我師姐的威信如何立得住，師姐在實驗室這么多年，也不是白學的，必須在小朋友面前秀秀我高大上的組織免疫熒光的片子，怎么也得讓他們崇拜一下，接下來就和大家分享下免疫熒光相關的經驗！

什么是免疫熒光

免疫熒光是在免疫學，生物化學和顯微技術的基礎上建立的一項技術，再用熒光抗體（或者）抗原作為探針檢測細胞或組織內相應的抗原（或抗體）。利用熒光顯微鏡可以看見熒光在細胞或者組織的表達，從而確認抗原或抗體的性質和定位。常用的方法有直接法和間接法。
 

間接法實驗步驟說明

冰凍切片為例：

1.切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復溫，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮完全干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

2.抗原修復：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復緩沖液（PH8.0）的修復盒中，于微波爐內中低火5min進行抗原修復。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

3.封閉：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內滴加3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。

4.加一抗：甩掉封閉液，在切片上滴加配好的一抗，平放于濕盒內4°C孵育過夜（濕盒內加少量水防止抗體蒸發）。

5.加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的熒光二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。

6.DAPI復染細胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

7.封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

8.鏡檢拍照：切片于Echo Revolve Gen2正倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。

顯微鏡在最后結果的呈現中發揮重要作用，我用的Echo Revolve Gen2正倒置熒光顯微鏡那是其他小伙伴羨慕的對象。

第一：高顏值，2021繆斯（MUSE）國際設計獎鉑金獎 。

 

第二：獨有的實時DHR數字處理技術，通過數字化圖像處理，在鏡下實時顯示高分辨圖像，清晰展現樣本細微結構，顛覆傳統成像效果。
 

第三：Z軸高精度自動層掃，配合實時DHR數字降噪技術，在保持高分辨率的同時，對較厚樣本進行全景深掃描合成，實現全景深觀察。

下面秀一秀師姐的熒光圖

部分圖源：網絡，侵刪