在免疫組織化學染色中，冰凍切片是被研究人員使用最多的一種切片方法。原因是這種切片方式能夠較完好地保存各種抗原的免疫活性及酶類，特別是對有機溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細胞膜表面抗原和水解酶保存；而且對組織存儲的形態(tài)沒有限制，新鮮組織和已固定的組織都可使用冰凍切片。
 

 

冰晶是如何形成的呢？
冰凍切片中按照冰晶形成在細胞內(nèi)外的位置不同，表現(xiàn)形式有細胞外冰晶、細胞質(zhì)內(nèi)冰晶、細胞核內(nèi)冰晶。在冰凍切片中，細胞外冰晶是冰凍切片中最多見的，各種組織均可以出現(xiàn)。

冰晶形成的原因是組織冷凍速度太慢。冰凍開始時，冰晶成核率較慢，以后逐漸增加，其臨界溫度為-33℃，從-30℃降至-43℃之間，成核率急劇增加，然后再減慢。冰晶的大小與其生長速率成正比，而與成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的數(shù)量愈多則愈小，對組織結(jié)構(gòu)影響愈嚴重。因此，應(yīng)盡量降低冰晶的數(shù)量。要減少冰晶形成，組織冷凍的方式和操作流程至關(guān)重要。

如何解決冰晶問題，提高切片質(zhì)量？
可采取速凍措施減少冰晶的形成，使組織溫度驟降，縮短溫度下降（-33℃~ -43℃）所需時間，從而減少冰晶的形成。目前已知的方法有：

1. 使用液氮；這種可快速冷凍組織，有效減少冰晶形成。但因技術(shù)成本和管理成本高，使用過程安全性不高，存在生物安全問題等因素，沒有被廣泛運用。
2. 采用半導體制冷技術(shù)；瑞沃德Minux®智能恒溫冷凍切片機使用該技術(shù)，一鍵啟動快冷模式，設(shè)備自動開啟固定吸熱塊，可在1-3分鐘內(nèi)把溫度降至-55℃~-60℃。

快速冷凍組織操作流程

*注意：

• OCT包埋劑影響組織冷凍速度，使用須適量。
• 冷凍過組織的固定式吸熱塊，必須放在速凍臺上再次降溫后使用。
• 可將組織置于20%、30%蔗糖溶液梯度脫水，利用高滲吸收組織中水分，減少組織含水量。

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